[发明专利]一种水中病毒的富集及检测方法

说明书

本发明公开了一种水中病毒的富集及检测方法，包括向水中加入絮凝剂，同时调节水样pH值，混合、静置、过滤，将所获得胶体用磷酸盐缓冲液重悬，部分重悬液在组织研磨后进行核酸提取及定量PCR检测。本发明方法在富集过程中避免了二次加入有机或无机洗脱物质对后续操作过程的干扰，同时能够及时、高效地获得检测结果，不受水质水量的影响。而且本发明方法操作简单，不需要进行预处理，减少了预过滤过程造成的病毒损失；设备易得，试剂成本低，一次性投入少，处理时间短，具有广泛的适应性，适合推广应用。

技术领域

本发明涉及一种水中病毒的富集及检测方法，特别涉及污水中病毒的富集及检测方法，属于生物分析测试和环境监测领域。

背景技术

环境中存在的各种致病病毒对人类健康造成了极大的危害。目前已经证实，污水中含有多种不同种类的病毒，如诺如病毒、脊髓灰质炎病毒、甲肝病毒、轮状病毒等等，这些病毒以水为媒介，经常引起传染病的爆发，因此有必要对其进行快速高效的检测，从而预防传染病大规模爆发流行。

因此，对污水中病毒的检测，是非常必要的，这可以为疫情的爆发提供有效的预警，为公共卫生部门决定是否封锁城市争取宝贵的时间，从而有利于避免大范围传播和扩散。

但是，水样体积巨大，其中病毒含量相对较少，现有的研究手段很难直接从水中检出病毒，因此在检测前先对水中的病毒进行富集就十分必要。

病毒的富集不同于细菌，由于病毒颗粒直径较小，很难依靠机械阻留于膜上实现富集。世界各国各地学者及机构对如何实现水体中病毒的有效富集进行了大量探索，美国和欧盟也颁布了相应的指导性文件，如美国“水和废水检测标准方法”中的9510部分以及欧洲标准协会发布的BS EN14486-2005等。总结下来，对病毒的富集浓缩主要有以下几种方法：吸附洗脱法、絮凝沉淀法、免疫学法、超滤法、超速离心法、电泳法、反渗透等方法。尽管富集方法较多，但是却存在诸如操作复杂、价格昂贵、耗费时间较长、效果不稳定、易受到水质水量的影响、难以推广等许多问题。

本发明能够实现对水中病毒的富集，之后采用研磨的方式将病毒从富集后的胶体中释放，再进行核酸提取及荧光定量PCR检测，操作简单、病毒回收率高，能够快速高效获得结果，避免了因方法耗费时间长而错过良好决策时机的问题。

发明内容

本发明的目的是针对现有水中病毒浓度检测过程中由于富集低浓度病毒存在的技术问题，提供一种水中病毒的富集及检测方法，本发明方法中病毒富集不受待测水体的水质水量的影响，病毒富集效率高，效果稳定，病毒浓度检测结果准确。

为实现本发明的目的，本发明一方面提供一种水中病毒的富集方法，包括首先测定或/和调节水的pH；接着加入絮凝剂，对水中病毒进行絮凝处理；然后进行过滤处理，获得富集病毒。

其中，所述病毒为猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）、轮状病毒（PORV）、禽流感病毒（AIV）、猪伪狂犬病毒（PRV）、猪细小病毒（PPV）或猪圆环病毒（PCV），优选为猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）；所述水选择农村或城市生活污水、医院污水、畜禽养殖厂污水、屠宰污水、农贸市场污水、河，湖等自然水体或饮用水；所述调节水的pH为调节水的pH值为4-9，优选为5-7，进一步优选为6。

若测定的水的pH值为4-9，则不需要进行pH调节；如果测定的水的pH值不在4-9之间，则添加pH调节剂，调整水的pH至4-9，优选为5-7，进一步优选为6。

pH调节剂选盐酸或氢氧化钠溶液，优选为1M盐酸溶液或氢氧化钠溶液。

特别是，所述絮凝剂选择铝盐絮凝剂，优选为氯化铝、硫酸铝、聚合氯化铝或聚合硫酸铝铁，优选为氯化铝。

尤其是，加入絮凝剂后，水样中的絮凝剂铝离子浓度为0.001-0.01M，优选为0.001-0.003M，进一步优选为0.003M。