[发明专利]一种青海大黄下胚轴组培与快繁方法

权利要求书

1.一种青海大黄下胚轴组培与快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)外植体灭菌处理：选取饱满的青海大黄种子作为外植体，先采用蒸馏水浸泡3h，并在操作台剥壳去翅，用无菌滤纸滤干后置于50ml离心管内，用75％乙醇充分浸泡20s，用ddH₂O冲洗3次，再用2％NaClO消毒液浸泡20min，用ddH₂O反复冲洗4～5次，再置于铺有无菌滤纸的无菌培养皿中滤干种子表面水分，待用；

(2)初代培养基筛选：将步骤(1)的待用无菌外植体接种到初代培养基中，种子胚轴朝下，1/3种子浸没在培养基中，光照培养箱温度为20±1℃，光照培养16h/d，暗培养8h/d，光强阈值为4800～6000lx，培养30d后萌发生长成苗；

(3)下胚轴愈伤组织诱导：将步骤(2)获得的无菌苗放入无菌培养皿中，用无菌滤纸吸干表面水分，使用无菌手术刀切分，取下胚轴接种到诱导培养基中，光照培养箱温度为20±1℃，暗培养7d，光照培养8d，光强阈值为4800～6000lx，培养15d后诱导出愈伤组织；

(4)下胚轴愈伤组织增殖培养：将步骤(3)诱导出的下胚轴愈伤组织移栽到增殖培养基中培养20d；

(5)下胚轴愈伤组织芽分化：将步骤(4)的下胚轴愈伤组织移栽到芽分化培养基中，培养15d后诱导出芽；

(6)生根培养：将步骤(5)的无菌芽切分为单株，每株为2～3片叶片，移栽到生根培养基中，光照培养箱温度为20±1℃，光照培养16h/d，暗培养8h/d，光强阈值为4800～60001x，培养14d后得到长势良好的青海大黄组培苗；

(7)组培苗移栽：将步骤(6)得到的生根苗去除根部培养基后移栽至装有营养基质土的花盆中，室温25℃，光照12h/d，湿度55％-65％，每周喷施一次花多多1号，2000倍稀释。

2.根据权利要求1所述的一种青海大黄下胚轴组培与快繁方法，其特征在于，所述步骤(2)中，初代培养基为：MS4.43g/L+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+琼脂3g/L+蔗糖30g/L，PH值为5.8。

3.根据权利要求1所述的一种青海大黄下胚轴组培与快繁方法，其特征在于，所述步骤(3)中，诱导培养基为：MS4.43g/L+6-BA1.5mg/L+NAA1.5mg/L+琼脂3g/L+蔗糖30g/L，PH值为5.8。

4.根据权利要求1所述的一种青海大黄下胚轴组培与快繁方法，其特征在于，所述步骤(4)中，增殖培养基为：MS4.43g/L+KT2.0mg/L+6-BA1.0mg/L+NAA1.5g/L+琼脂3g/L+蔗糖30g/L，PH值为5.8。

5.根据权利要求1所述的一种青海大黄下胚轴组培与快繁方法，其特征在于，所述步骤(5)中，芽分化培养基为：MS4.43g/L+6-BA1.0mg/L+NAA1.0mg/L+琼脂3g/L+蔗糖30g/L，PH值为5.8。

6.根据权利要求1所述的一种青海大黄下胚轴组培与快繁方法，其特征在于，所述步骤(6)中，生根培养基为：MS2.215g/L+琼脂5g/L+蔗糖15g/L，PH值为5.8。

7.根据权利要求1所述的一种青海大黄下胚轴组培与快繁方法，其特征在于，所述步骤(7)中，营养基质土的组分配比为基质土∶蛭石∶珍珠岩＝3∶1∶1，PH值为6.5-7.0。

8.根据权利要求1所述的一种青海大黄下胚轴组培与快繁方法，其特征在于，所述步骤(2)-(6)中，在各培养基中添加溶剂ddH₂O，用NaOH、HCl调整PH值至5.8，并在121℃下灭菌20min。