[发明专利]一种丁酸梭菌的培养方法

权利要求书

1.一种丁酸梭菌的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、制备丁酸梭菌菌悬液：吸取丁酸梭菌菌液，接种于RCM培养基中厌氧培养12-48h，然后1000-3000转离心2-5分钟，去除上层培养液保留沉淀，加入无菌生理盐水清洗沉淀，离心2-5分钟，重复清洗1-3次后，加入无菌生理盐水，与沉淀混匀，制成丁酸梭菌菌悬液；

S2、一级种子液制备：将步骤S1得到的丁酸梭菌菌悬液，接种于种子培养基中，进行密封厌氧培养12-18h，调节至pH值至6.0～7.0时，得到一级种子培养液；

S3、二级种子液制备：将步骤S2得到的一级种子培养液，接种于种子培养基中，进行密封厌氧培养12-18h，调节至pH值至6.0～7.0时，接种时往种子培养基中添加罗格列酮0.005-0.05g，发酵完成后，过滤得到二级种子培养液；

S4、发酵培养：将步骤S3得到的二级种子液接种于含有发酵培养基的发酵罐内，密封厌氧培养，调节至pH值至5.0-6.0；

所述发酵培养基为，1L培养基由以下组分组成：药用层孔菌(FOMES OFFICINALIS)提取物1-5g，葡萄糖5.0～15.0g，酵母粉10.0～15.0g，蛋白胨5.0-15.0g，磷酸氢二钾0.25～0.75g，短梗霉多糖5-20g，七水合硫酸镁0.01-0.5g，维生素B1 0.05-0.1g，余量为无菌水，pH6.0～7.0，115℃，灭菌30min，即得。

2.根据权利要求1所述培养方法，其特征在于，所述种子培养基为，1L培养基由以下组分组成：葡萄糖5.0～15.0g，酵母粉5.0～15.0g，蛋白胨5.0-15.0g，磷酸氢二钾0.25～0.75g，七水合硫酸镁0.2～0.6g，硫酸锰0.05～0.2g，氯化钙0.5～1.5g，硫酸亚铁2.0～7.0g，L-半胱氨酸盐酸盐0.2～0.7g，丁酸钠0.1-0.05g，余量为无菌水，pH6.0～7.0，115℃，灭菌30min，即得。

3.根据权利要求2所述培养方法，其特征在于，1L培养基由以下组分组成：葡萄糖10.0g，酵母粉10.0g，蛋白胨10g，磷酸氢二钾0.5g，七水合硫酸镁0.4g，硫酸锰0.1g，氯化钙1g，硫酸亚铁4g，L-半胱氨酸盐酸盐0.5g，丁酸钠0.08g，余量为无菌水，pH6.5，115℃，灭菌30min，即得。

4.根据权利要求1所述培养方法，其特征在于，所述发酵培养基为，1L培养基由以下组分组成：药用层孔菌(FOMES OFFICINALIS)提取物1-5g，葡萄糖10g，酵母粉13g，蛋白胨10g，磷酸氢二钾0.5g，短梗霉多糖13g，七水合硫酸镁0.2g，维生素B1 0.08g，余量为无菌水，pH6.5，115℃，灭菌30min，即得。

5.根据权利要求1所述培养方法，其特征在于，所述步骤S2和S3中的接种量为0.5-2％(v/v)。

6.根据权利要求1所述培养方法，其特征在于，所述步骤S4中将二级种子液接入发酵培养基中进行发酵培养的接种量为1-10％。

7.根据权利要求1所述培养方法，其特征在于，所述厌氧培养的温度为28～37℃，所述厌氧培养的压力为0.01～0.05Mpa，所述厌氧培养的搅拌转速为50-100r/min，所述厌氧培养的时间为12～24h。