[发明专利]一种脂磷壁酸疫苗制剂及其应用

说明书

本发明公开了一种脂磷壁酸疫苗制剂及其应用，涉及疫苗领域，具体是一种脂磷壁酸为载体和自佐剂的疫苗制剂及其应用。本发明提供的脂磷壁酸疫苗制剂是将肿瘤相关糖抗原或多肽抗原和脂磷壁酸以共价连接的方式进行组合得到，成分明确、免疫原性强，能够引起高滴度的IgG抗体。疫苗分子热稳定性好，易于保存。

技术领域

本发明属于疫苗研制技术领域，具体涉及一种脂磷壁酸疫苗制剂及其应用，具体是一种脂磷壁酸为载体和自佐剂的疫苗制剂及其应用。

背景技术

在癌细胞表面过度表达的异常聚糖，即肿瘤相关糖抗原(TACAs)，是开发抗癌疫苗的诱人靶点，糖抗原通常是不依赖于T细胞的抗原，其免疫原性较低，不能诱导抗体亲和力成熟和免疫记忆。为了克服这一障碍，传统的策略是将糖抗原与提供T细胞表位的载体蛋白结合，使TACA由抗原提呈细胞(APCs)摄取，并由MHCII复合物与载体表位一起呈递给辅助性T细胞。因此，诱导的Th细胞可引发较好的B细胞反应，并可显著提高糖抗原的免疫原性。例如，sTn抗原与锁孔血蓝蛋白(KLH)结合作为疫苗疗法，在临床试验中，Globo H与KLH或白喉毒素突变体(CRM197)偶联，并在临床试验中显示出有效性。

虽然基于TACA的糖蛋白疫苗已经取得了很大的成功，但常用的蛋白载体，如锁孔血蓝蛋白，牛血清白蛋白等，存在着一些缺点，比如蛋白本身引起的免疫反应会压制对所载抗原的免疫反应、热稳定性差、需要和佐剂一起使用、引起副作用等。因此，亟需开发新的具有更好效果的疫苗载体和新型结构的疫苗。

自佐剂疫苗是开发抗肿瘤和病原体糖类疫苗的新方向。在这种疫苗中，一种或多种分子抗原与一种化学结构明确的合成载体结合。它能够引起从低亲和力和短寿命免疫球蛋白M(IgM)抗体到高亲和力免疫球蛋白G(IgG)抗体的基本类别转换。

磷壁酸是一种新型的配体，根据在细胞表面上的固定方式，磷壁酸分为壁磷壁酸(Wall teichoic acid)和膜磷壁酸(Membrane teichoic acid)两种，膜磷壁酸又称脂磷壁酸(Lip teichoic acid，LTA)。

革兰氏阳性菌表面脂磷壁酸(LTA)是一种TLR2/6激动剂。LTA通常含有聚甘油或糖醇磷酸酯主链，并具有D-丙基氨基酸、糖基化等多种侧链修饰，主链末端的磷酸盐与细胞质膜中的糖脂(如二糖胺)相连，二糖胺是糖基二酰甘油的低聚糖部分。其中，LTA的末端糖脂部分主要负责与TLR2受体结合，从而引发相应的免疫反应。作为一种TLR特异性配体，LTA能够通过多种机制提高药物疗效：TLR刺激抗原呈递细胞(APC)导致表面肽/MHC复合物增加，产生共刺激分子和细胞因子分泌，产生T细胞活化和增殖所需的信号等。此外，与APC结合的LTA可与循环抗体相互作用，激活补体级联，诱导被动免疫杀伤现象。LTA侧链氨基可用于与抗原偶联，偶联后的抗原可通过多价、簇状呈递给DC细胞，是理想的疫苗载体。此外，脂磷壁酸的重复单元具有带正电荷的氨基和带负电的磷酸，这可能导致脂磷壁酸携带两性多糖(ZPS)的功能，即在缺乏蛋白质的情况下激活MHCII介导的T细胞反应。因此LTA可以用于疫苗载体并作为自佐剂。

目前尚未有将肿瘤相关抗原偶联到LTA分子上从而构建新型的疫苗分子的相关技术公开或文献报道。其可行性也尚无推断或论证，需要进一步的实验研究和验证。

发明内容

发明目的：本发明的目的是为了克服现有蛋白载体疫苗存在的问题，例如蛋白本身会引起免疫反应、肿瘤相关糖抗原的蛋白偶联物效果不佳、蛋白缀合物热稳定性差等，提供一种新型的以细菌的脂磷壁酸LTA为自佐剂的疫苗制剂，其免疫性能好，可以引发高滴度的抗体。

本发明利用LTA的免疫刺激性质，将具有潜力的肿瘤相关抗原通过共价键偶联到LTA分子上，从而构建新型的疫苗分子，刺激产生更高滴度、更高亲合力的免疫反应，达到治疗或预防肿瘤的目的。

技术方案：为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

本发明的第一个目的是提供一种脂磷壁酸疫苗制剂，所述疫苗制剂包括：