[发明专利]一种用于鉴定大口黑鲈北方亚种、佛罗里达亚种及其杂交种的InDel标记及其应用

权利要求书

1.一种鉴定大口黑鲈北方亚种、佛罗里达亚种及北方亚种×佛罗里达杂交种的检测方法，包括以下步骤：

提取待测样品DNA，用引物组PCR扩增待测样品DNA，根据扩增产物扩增条带判断待测样品种类；

其中，所述引物组的核苷酸序列为：

上游引物Indel-F：5 '-CGTGTCAGCTAACTACACCTGA-3 '(SEQ ID NO .2)；

下游引物Indel-R：5 '-ATACTGCCCCGCAAAGGAAA-3 '(SEQ ID NO .3)；

所述引物组用于扩增InDel分子标记；所述InDel分子标记位于大口黑鲈北方亚种20号染色体第8035398位，为长度为82bp的插入/缺失核苷酸序列，所述核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

所述InDel标记在北方亚种中对应的双链DNA核苷酸序列均为一段长度为82bp的插入序列；在佛罗里达亚种中对应的双链DNA核苷酸序列均为一段长度为82bp的缺失序列；在北方亚种×佛罗里达亚种杂交种中对应的双链DNA核苷酸序列分别为一段长度为82bp的插入序列以及一段长度为82bp的缺失序列；

所述检测方法中判断待测样品种类的标准为：

若仅显示长度为595bp的扩增条带，则待测产物为大口黑鲈北方亚种；

若仅显示长度为513bp的扩增条带，则待测产物为大口黑鲈佛罗里达亚种；

若显示长度为513bp和595bp两条扩增条带，则待测产物为北方亚种×佛罗里达杂交种；

其中，595bp的扩增条带如SEQ ID NO .4所示；

513bp的扩增条带如SEQ ID NO .5所示。

2.检测试剂或检测试剂盒在鉴定大口黑鲈北方亚种、佛罗里达亚种和北方亚种×佛罗里达杂交种中的应用；

所述检测试剂或检测试剂盒含有引物组；

所述引物组的核苷酸序列为：

上游引物Indel-F：5 '-CGTGTCAGCTAACTACACCTGA-3 '(SEQ ID NO .2)；

下游引物Indel-R：5 '-ATACTGCCCCGCAAAGGAAA-3 '(SEQ ID NO .3)；

所述引物组用于扩增InDel分子标记；所述InDel分子标记位于大口黑鲈北方亚种20号染色体第8035398位，为长度为82bp的插入/缺失核苷酸序列，所述核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

所述InDel标记在北方亚种中对应的双链DNA核苷酸序列均为一段长度为82bp的插入序列；在佛罗里达亚种中对应的双链DNA核苷酸序列均为一段长度为82bp的缺失序列；在北方亚种×佛罗里达亚种杂交种中对应的双链DNA核苷酸序列分别为一段长度为82bp的插入序列以及一段长度为82bp的缺失序列；

鉴定大口黑鲈北方亚种、佛罗里达亚种和北方亚种×佛罗里达杂交种的标准为：

若仅显示长度为595bp的扩增条带，则待测产物为大口黑鲈北方亚种；

若仅显示长度为513bp的扩增条带，则待测产物为大口黑鲈佛罗里达亚种；

若显示长度为513bp和595bp两条扩增条带，则待测产物为北方亚种×佛罗里达杂交种；

其中，595bp的扩增条带如SEQ ID NO .4所示；

513bp的扩增条带如SEQ ID NO .5所示。