[发明专利]抗体及其制备方法和编码核酸以及工程细胞

权利要求书

1.一种制备抗体的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

S1、获得抗原免疫后的人体或动物体的血液样本，并将所述血液样本分为第一样本和第二样本；

S2、对所述第一样本进行B细胞mRNA受体测序，得到第一测序结果；

S3、对所述第二样本进行B细胞的单细胞mRNA VDJ测序，得到第二测序结果；

S4、将所述第一测序结果和所述第二测序结果进行抗原特异性聚类，得到B细胞受体重链簇；

S5、在所述B细胞受体重链簇中根据表达量筛选来源于单细胞VDJ测序的候选中和抗体序列重链；

S6、对筛选得到的候选中和抗体序列重链查找其配对的轻链，对于多条轻链根据表达量进行筛选进行配对，得到轻-重链对；

S7、从所述轻-重链对中根据表达量、种型、CDR1/CDR2突变率、匹配注释得分、拼接质量得分、可产生性、被测序细胞完整性、全长完整度筛选出候选轻-重链对；

S8、提取候选轻-重链对的可变区域部分的序列，根据参考基因组序列添加V基因头部不变序列部分，并且添加恒定区片段形成完整的中和抗体序列；

S9、将所述中和抗体序列进行表达并通过ELISA试验进行筛选，得到目标抗体。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述抗原包括病毒、细菌、小分子化合物半抗原；所述动物体包括哺乳动物、鸟类，优选包括猴、牛、羊、兔、鼠、犬。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述单细胞VDJ测序采用10x Genomics ImmuneProfiling或Smart-SEQ/Smart-SEQ2协议；所述抗原特异性聚类方法采用iSMART方法或Gliph2方法。

4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述抗原特异性聚类的筛选条件包括：(1)簇内包含来自单细胞VDJ测序的重链序列；(2)簇内所有重链CDR3区域氨基酸序列不全相同；3)簇内重链序列种型包含至少两种，且符合类型转换事件顺序。

5.根据权利要求1所述的方法，其中，所述V基因头部不变序列部分的重链为SEQ IDNO.7所示，轻链为SEQ ID NO.8所示；所述恒定区片段的序列的重链为SEQ ID NO.9所示，轻链为SEQ ID NO.10所示。

6.根据权利要求1所述的方法，其中，所述抗原免疫后的人体为传染病人，特别是严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)感染者。

7.一种抗严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)的抗体，该抗体具有轻链和重链，其特征在于，所述轻链的可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述重链的可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

8.根据权利要求7所述的抗体，其特征在于，所述轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述重链的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。

9.一种核酸组，其特征在于，所述核酸组包括编码权利要求8所述的抗严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)的抗体的轻链的第一核酸和编码权利要求8所述的抗严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)的抗体的重链的第二核酸，优选地，所述核酸的核苷酸序列如SEQ ID NO.5及SEQ ID NO.6所示。

10.一种工程细胞，其特征在于，该工程细胞表达权利要求8或9所述的抗严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)的抗体。