[发明专利]抗体及其制备方法和编码核酸以及工程细胞

说明书

本公开涉及一种制备抗体的方法、抗体、编码该抗体的核酸和一种工程细胞。本公开提供的抗体能够抗严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS‑CoV‑2)，其特异性好、敏感性高，病原中和效果优异。

技术领域

本公开涉及生物技术领域，具体地，涉及一种制备抗体的方法、抗体、编码该抗体的核酸和一种工程细胞。

背景技术

中和抗体是当病原微生物侵入机体时会产生相应的抗体。病原微生物入侵细胞时需要依赖病原体自身表达的特定分子与细胞上的受体结合，才能感染细胞，并进一步扩增。中和抗体是B淋巴细胞产生的某些抗体，能够与病原微生物表面的抗原结合，从而阻止该病原微生物黏附靶细胞受体，防止侵入细胞。

严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)引起的新冠肺炎COVID-19已作为严重的疾病在全球传播大流行(Callaway et al.，2020)。目前，尚无针对病毒与靶标相互作用的经过验证的疗法可用于新冠肺炎。而中和抗体由人体免疫系统产生，可以有效阻止病毒感染细胞。但运用康复患者血浆进行治疗虽成效显著，但由于血浆来源有限，不能广泛使用。因此亟需对筛选出有效的中和抗体并实现量产以供大批量治疗需求。

发明内容

本公开的目的是提供一种针对严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)的中和抗体。

本发明的发明人对抗体的筛选方法进行了改进，较快地获得了一株性能优异的抗体的核酸编码序列和氨基酸序列，由此得到了本发明。

第一方面，本公开提供一种制备抗体的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

S1、获得抗原免疫后的人体或动物体的血液样本，并将所述血液样本分为第一样本和第二样本；

S2、从所述第一样本中提取mRNA并进行B细胞受体测序，得到第一测序结果；

S3、从所述第二样本中提取mRNA并进行B细胞的单细胞VDJ测序，得到第二测序结果；

S4、将所述第一测序结果和所述第二测序结果的重链部分混合进行抗原特异性聚类，得到B细胞受体重链簇；

S5、在所述B细胞受体重链簇中根据表达量筛选来源于单细胞VDJ测序的候选中和抗体mRNA序列重链；

S6、对筛选得到的候选中和抗体序列重链查找其配对的轻链，对于多条轻链根据表达量进行筛选进行配对，得到轻-重链对；

S7、从所述轻-重链对中根据表达量、种型、CDR1/CDR2突变率、匹配注释得分、拼接质量得分、可产生性、被测序细胞完整性、全长完整度筛选出候选轻-重链对；

S8、提取候选轻-重链对的可变区域部分的序列，根据参考基因组序列添加V基因头部不变序列部分，并且添加恒定区片段形成完整的中和抗体序列；

S9、将所述中和抗体序列进行表达并通过ELISA试验进行筛选，得到目标抗体。

第二方面，本公开提供了一种抗严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)的抗体，该抗体具有轻链和重链，所述轻链的可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述重链的可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

可选地，所述轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述重链的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。

第三方面，本公开还提供了一种核酸组，所述核酸组包括编码所述的抗抗严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)的抗体的轻链的第一核酸和编码所述的抗严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)的抗体的重链的第二核酸，优选地，所述核酸的核苷酸序列如SEQ ID NO.5及SEQ ID NO.6所示。