[发明专利]一种凝结芽孢杆菌素的提取方法

权利要求书

1.一种凝结芽孢杆菌素的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、配制培养基：将下列组分按所述重量百分数加入，混合均匀：葡萄糖1.8～2.2％，大豆蛋白胨1.2～1.8％，酵母浸粉0.3～0.7％，硫酸镁0.04～0.08％，硫酸锰0.02～0.06％，吐温-80 0.06～0.1％，乳酸菌素促进剂0.1～0.2％，水94.86～96.48％，调节培养基的pH值至6.8～7.2；

S2、接种：取出实验室已分离的凝结芽孢杆菌，按照1.5～2.5％的接种量接种至100mL的培养基中，在36～38℃的温度下发酵培养32～40h，得发酵液；

S3、将步骤S2制得的发酵液于7000～9000rpm的转速下离心10～20min，取上清液，将上清液进行微孔过滤除菌，然后调节pH值为7.0，用4℃，质量分数为60～70％饱和度的硫酸铵溶液进行沉淀，收集下层沉淀；

S4、将步骤S3收集的下层沉淀溶于为pH6.5的磷酸钠缓冲液中，然后经透析，得到含有细菌素的粗提液；

S5、将步骤S4制得的粗提液经冷冻干燥浓缩，采用Sephadex-G100进行纯化，干燥，然后利用SDS-PAGE的方法测定其分子量，即得；步骤S1中所述的乳酸菌素促进剂由精氨酸与维生素D按重量比10～15：1～4组成；步骤S4中所述的透析过程为用分子量为1000Da的透析袋透析；步骤S5中所述的冷冻干燥过程为将粗提液置于-50～-40℃，5～10Pa下冷冻处理20～30min即可。

2.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、配制培养基：将下列组分按所述重量百分数加入，混合均匀：葡萄糖2.0％，大豆蛋白胨1.5％，酵母浸粉0.5％，硫酸镁0.06％，硫酸锰0.04％，吐温-80 0.08％，乳酸菌素促进剂0.15％，水95.67％，调节培养基的pH值至7.0；

S2、接种：取出实验室已分离的凝结芽孢杆菌，按照2.0％的接种量接种至100mL的培养基中，在36℃的温度下发酵培养36h，得发酵液；

S3、将步骤S2制得的发酵液于8000rpm的转速下离心15min，取上清液，将上清液进行微孔过滤除菌，然后调节pH值为7.0，用4℃，质量分数为65％的饱和度的硫酸铵溶液进行沉淀，收集下层沉淀；

S4、将步骤S3收集的下层沉淀溶于为pH 6.5的磷酸钠缓冲液中，然后经透析，得到含有细菌素的粗提液；

S5、将步骤S4制得的粗提液经冷冻干燥浓缩，采用Sephadex-G100进行纯化，干燥，然后利用SDS-PAGE的方法测定其分子量，即得。

3.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤S1中所述的乳酸菌素促进剂由精氨酸与维生素D按重量比13：3组成。

4.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤S3中进行微孔过滤除菌时过滤孔径大小为0.45μm。

5.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤S3中所述的沉淀为将过滤除菌后的发酵液与硫酸铵溶液混合后，于8000rpm转速下离心20min，即可。