[发明专利]一种凝结芽孢杆菌素的提取方法

说明书

本发明属于细菌培养领域，具体涉及一种凝结芽孢杆菌素的提取方法。本发明提供的培养方法，采用自制培养基进行培养，将成功分离的凝结芽孢杆菌按照1.5～2.5％的接种量接种到培养基中，在36～38℃的温度下发酵培养35～38h，然后经发酵液粗离心、微孔过滤、粗提液浓缩等过程制得。本发明提供的培养方法，可以有效抑制其他细菌生长，制成的凝结芽孢杆菌素的产量大，纯化度高，活性高，适于大规模的生产利用。

技术领域

本发明属于细菌培养领域，具体涉及一种凝结芽孢杆菌素的提取方法。

背景技术

乳酸菌素是由某些乳酸菌细菌在代谢过程中通过核糖体合成机制产生的具有抑菌活性的多肽或前体多肽。乳酸菌素无毒，无副作用，可作为无抗添加剂应用于动物生产中。但是，乳酸菌素的产量受到很多因素的影响，现有的报道表明，不同的菌株、以及同一菌株在发酵中培养的时间、培养的温度、培养基的pH、菌液的接种量、甚至培养基的成分如碳源、氮源、磷酸盐等等，都会影响乳酸菌素的产量。其中培养基的成分、培养的时间、培养的温度、培养的pH等这些因素影响着菌株的生长和乳酸菌素的合成。因此，如何通过筛选菌株，设置培养条件，使其得到的乳酸菌素产量大，活性高，成为了乳酸菌素的研究热点。

凝结芽孢杆菌在分类学上属于芽孢杆菌属，细胞呈杆状，革兰氏阳性菌，端生芽孢，无鞭毛。但是其与其他芽孢杆菌的区别在于，它是唯一可以生产乳酸的芽孢杆菌(经分解糖类生成L-乳酸)，为同型乳酸发酵菌，最适生长温度为45-50℃，最适pH为6.6-7.0。现有技术中关于凝结芽孢杆菌的研究很多，但多是集中在其应用领域，怎样提高其中的乳酸菌素，现有技术中并未记载。

发明内容

针对现有技术普遍存在的缺陷，本发明创造性的提供了一种凝结芽孢杆菌素的提取方法。本发明提供的培养方法，可以有效抑制其他细菌生长，制成的凝结芽孢杆菌素的产量大，纯化度高，活性高，适于大规模的生产利用。

为了达到上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种凝结芽孢杆菌素的提取方法，包括如下步骤：

S1、配制培养基：将下列组分按所述重量百分数加入，混合均匀：葡萄糖1.8～2.2％，大豆蛋白胨1.2～1.8％，酵母浸粉0.3～0.7％，硫酸镁0.04～0.08％，硫酸锰0.02～0.06％，吐温-80 0.06～0.1％，乳酸菌素促进剂0.1～0.2％，水94.86～96.48％，调节培养基的pH值至6.8～7.2；

S2、接种：取出实验室已分离的凝结芽孢杆菌，按照体积比为1.5～2.5％的接种量接种至100mL的培养基中，在36～38℃的温度下发酵培养32～40h，得发酵液；

S3、将步骤S2制得的发酵液于7000～9000rpm的转速下离心10～20min，取上清液，将上清液进行微孔过滤除菌，然后调节pH值为7.0，用4℃，质量分数为60～70％饱和度的硫酸铵溶液进行沉淀，收集下层沉淀；

S4、将步骤S3收集的下层沉淀溶于为pH6.5的磷酸钠缓冲液中，然后经透析，得到含有细菌素的粗提液；

S5、将步骤S4制得的粗提液经冷冻干燥浓缩，采用Sephadex-G100进行纯化，干燥，然后利用SDS-PAGE的方法测定其分子量，即得。

优选地，所述提取方法包括如下步骤：

S1、配制培养基：将下列组分按所述重量百分数加入，混合均匀：葡萄糖2.0％，大豆蛋白胨1.5％，酵母浸粉0.5％，硫酸镁0.06％，硫酸锰0.04％，吐温-80 0.08％，乳酸菌素促进剂0.15％，水95.67％，调节培养基的pH值至7.0；

S2、接种：取出实验室已分离的凝结芽孢杆菌，按照2.0％的接种量接种至100mL的培养基中，在36℃的温度下发酵培养36h，得发酵液；