[发明专利]一种在活体细胞上实时检测消皮素D的方法及其应用

权利要求书

1.一种在活体细胞上实时检测消皮素D的方法；其特征在于，包括以下步骤：

步骤1：构建含有双荧光标签标记的GSDMD过表达质粒；

步骤2：用上述步骤1中获得的质粒进行细胞转染；对转染后的细胞进行药物干预诱导炎症小体活化及下游GSDMD切割；

步骤3：通过荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察细胞内荧光强弱和颜色的变化；

步骤4：通过线粒体荧光染色标记线粒体，通过荧光共定位观察GSDMD活性片段在线粒体上的定位情况。

2.如权利要求1所述的一种在活体细胞上实时检测消皮素D的方法，其特征在于：所述步骤1中双荧光标签标记GSDMD设为两种不同颜色的荧光蛋白序列设于GSDMD的N端和C端序列外侧。

3.如权利要求2所述的一种在活体细胞上实时检测消皮素D的方法，其特征在于：所述GSDMD的N端序列外侧设有蓝色荧光蛋白BFP序列。

4.如权利要求3所述的一种在活体细胞上实时检测消皮素D的方法，其特征在于：所述GSDMD的C端序列外侧设有黄色荧光蛋白EYFP序列。

5.如权利要求4所述的一种在活体细胞上实时检测消皮素D的方法，其特征在于：所述步骤4中线粒体荧光染色标记采用mitochondria线粒体绿色荧光探针。

6.如权利要求1至5中任何一项所述的一种在活体细胞上实时检测消皮素D的方法在诱导细胞炎症反应模型中的应用。

7.如权利要求1至5中任何一项所述的一种在活体细胞上实时检测消皮素D的方法在药物干预细胞炎症反应检测中的应用。

8.如权利要求1至5中任何一项所述的一种在活体细胞上实时检测消皮素D的方法在细胞炎症反应检测试剂盒中的应用。