[发明专利]一种长鳍真鲨年龄鉴定用素材的制备方法

权利要求书

1.一种长鳍真鲨年龄鉴定用素材的制备方法，其特征在于，先选取脊椎骨素材，然后包括如下步骤：

(1)提取：自第一背鳍处取约3-5节脊椎骨，冷冻保存；

(2)清洗：切除脊椎骨上肌肉及结缔组织，并用蒸馏水冲洗，然后将脊椎骨置于沸水中煮5-10min，除去难以清除的结缔组织，若仍有结缔组织附着，将其置于30％H₂O₂溶液中浸泡约1h-2h，后用蒸馏水浸泡反复冲洗干净并烘干；

(3)粗磨：在金相研磨机上使用120grits防水耐磨砂纸进行粗磨，将两面分别打磨至接近中心位置，约成3-5mm厚的脊椎骨薄片。

2.根据权利要求1所述的一种长鳍真鲨年龄鉴定用素材的制备方法，其特征在于，不同的尺寸脊椎骨使用不同的素材，所述步骤(1)提取的是较大脊椎骨素材。

3.根据权利要求1所述的一种长鳍真鲨年龄鉴定用素材的制备方法，其特征在于，在所述步骤(3)粗磨后，增加如下两个步骤：

(31)固定：用强力速粘胶将纵切片粘在载玻片上，椎体中心面朝下；

(32)磨片：先后分别使用600grits、1200grits的防水耐磨砂纸打磨切片，并随时在透射光解剖镜下观察其研磨程度，直至轮纹较为清晰，切片研磨厚度约为1mm时为最佳，将样品放至样品盒中待年龄鉴定。

4.根据权利要求1所述的一种长鳍真鲨年龄鉴定用素材的制备方法，其特征在于，所述脊椎骨素材选用研磨轮纹不清晰的脊椎骨及脊椎骨较小难以直接研磨的素材。

5.根据权利要求1所述的一种长鳍真鲨年龄鉴定用素材的制备方法，其特征在于，所述研磨轮纹不清晰的脊椎骨及脊椎骨较小难以直接研磨的素材制备方法包含如下步骤：

(1)提取：自第一背鳍处取约3-5节脊椎骨，冷冻保存；

(2)清洗：切除脊椎骨上肌肉及结缔组织，并用蒸馏水冲洗，然后将脊椎骨置于沸水中煮5-10min，除去难以清除的结缔组织，若仍有结缔组织附着，将其置于30％H₂O₂溶液中浸泡约1h-2h，后用蒸馏水浸泡反复冲洗干净并烘干；

(3)染色：将干燥的完整脊椎骨置于蒸馏水中浸泡12h，用酒精漂洗2 次后用蒸馏水冲洗干净，每隔16h使用4％KOH漂洗3次，最后置于1％KOH作为母液、质量浓度为0.01％的茜素红溶液中12h，取出后，使用1％KOH溶液浸泡1h，最终晾干。

6.根据权利要求2所述的一种长鳍真鲨年龄鉴定用素材的制备方法，其特征在于，较大脊椎骨素材的直径≥10mm的个体。

7.根据权利要求4所述的一种长鳍真鲨年龄鉴定用素材的制备方法，其特征在于，所述脊椎骨较小难以直接研磨的素材的直径＜10mm的个体。