[发明专利]一种长鳍真鲨年龄鉴定用素材的制备方法

说明书

本发明公开了一种长鳍真鲨年龄鉴定用素材的制备方法，先选取脊椎骨素材，然后包括如下步骤：(1)提取：自第一背鳍处取约3‑5节脊椎骨，冷冻保存；(2)清洗：切除脊椎骨上肌肉及结缔组织，并用蒸馏水冲洗，然后将脊椎骨置于沸水中煮5‑10min，除去难以清除的结缔组织，若仍有结缔组织附着，将其置于30％H₂O₂溶液中浸泡约1h‑2h，后用蒸馏水浸泡反复冲洗干净并烘干；(3)粗磨：在金相研磨机上使用120grits防水耐磨砂纸进行粗磨，将两面分别打磨至接近中心位置，约成3‑5mm厚的脊椎骨薄片。本发明对长鳍真鲨脊椎骨的纵截面进行打磨，用力均匀，打磨抛光的的脊椎骨切片用封片剂封片，保证轮纹能保持较长的时间。

技术领域

本发明涉及一种海洋生物年龄鉴定用素材的制备方法，特别涉及一种长鳍真鲨年龄鉴定用素材的制备方法。

背景技术

长鳍真鲨(Carcharhinus longimanus)隶属于真鲨目(Carcharhiniformes)真鲨科(Carcharhinidae)，是一种大型中上层鲨鱼，位于食物链顶端，曾是热带海域资源量最丰富的物种之一，也是常见的金枪鱼延绳钓兼捕鱼种之一。然而，随着近些年来过度捕捞的加剧以及海洋环境的恶化，长鳍真鲨资源量出现严重衰退，现已被国际自然保护联盟(IUCN)列为濒危物种。

鱼类年龄信息是进行渔业资源评估的基础，在种群动力学研究中，精确的年龄与生长信息有助于预测鱼类资源变动。脊椎骨具有稳定储存生长信息的特点，是研究鲨鱼类年龄和生长最有效的材料；脊椎骨呈双凹型，脊椎骨上轮纹特征为宽阔的不透明轮纹和狭窄的半透明轮纹交替排列，呈同心圆状。不透明轮纹形成于较为温暖的生长较快春夏季，半透明轮纹形成于温度较低生长缓慢的秋冬季，当年的不透明轮纹和翌年的半透明轮纹交界处即为年轮。

长鳍真鲨具有生长缓慢、性成熟期晚、繁殖周期长、寿命长等特征，使得其对捕捞压力承受能力极低，故加强长鳍真鲨年龄与生长的研究有助于评估其资源状况变动。其脊椎骨作为一种生长信息载体，它能稳定的储存机体输入的生长信息，揭示其生长发育过程。但随着鱼类年龄增长,脊椎骨半径的增大,靠近外缘的轮纹逐渐密集,甚至重叠，因此，选择何种年龄鉴定方法至关重要。

发明内容

本发明提供了一种长鳍真鲨年龄鉴定用素材的制备方法，其目的在于，通过染色法使完整脊椎骨上轮纹更加清晰，解决了较小脊椎骨切片不易研磨、研磨过程中易受损、研磨后轮纹清晰度不高等问题。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种长鳍真鲨年龄鉴定用素材的制备方法，先选取脊椎骨素材，然后包括如下步骤：

(1)提取：自第一背鳍处取约3-5节脊椎骨，冷冻保存；

(2)清洗：切除脊椎骨上肌肉及结缔组织，并用蒸馏水冲洗，然后将脊椎骨置于沸水中煮5-10min，除去难以清除的结缔组织，若仍有结缔组织附着，将其置于30％H₂O₂溶液中浸泡约1h-2h，后用蒸馏水浸泡反复冲洗干净并烘干；

(3)粗磨：在金相研磨机上使用120grits防水耐磨砂纸进行粗磨，将两面分别打磨至接近中心位置，约成3-5mm厚的脊椎骨薄片；

优选地，不同的尺寸脊椎骨使用不同的素材，所述步骤(1)提取的是较大脊椎骨素材。

优选地，在所述步骤(3)粗磨后，增加如下两个步骤：

固定：用强力速粘胶将纵切片粘在载玻片上，椎体中心面朝下；

磨片：先后分别使用600grits、1200grits的防水耐磨砂纸打磨切片，并随时在透射光解剖镜下观察其研磨程度，直至轮纹较为清晰，切片研磨厚度约为1mm时为最佳，将样品放至样品盒中待年龄鉴定。

优选地，所述脊椎骨素材选用研磨轮纹不清晰的脊椎骨及脊椎骨较小难以直接研磨的素材，