[发明专利]牛奶光氧化标志物的筛选

权利要求书

1.一种基于差异性代谢物评价牛奶光氧化程度的方法，其特征在于，包括：

a)采集在避光条件下和光照条件下的乳样代谢组学数据，并在代谢组学数据中提取代谢物信息；

b)建立分析模型，并对提取到的代谢物信息进行数据分析，确定光氧化导致的差异性代谢物；所述光氧化差异性代谢物为吲哚-3-甲醛、光色素、尿酸和核黄素；

c)结合筛选出的差异性代谢物，研究不同光氧化程度的牛奶中差异代谢物的含量动态变化情况，阐述不同氧化条件对差异性代谢物的影响；步骤c)中，所述不同光氧化程度牛奶的处理条件包括不同光照强度、不同光照时长和不同氧气含量。

2.根据权利要求1所述的基于差异性代谢物评价牛奶光氧化程度的方法，其特征在于，步骤a)中，对待测的乳样的处理及其代谢物的提取：

将所述避光条件和光照条件下的乳样进行离心，取下层液体溶于有机溶剂，再次离心，取上层溶液，经微孔过滤膜过滤后，即得。

3.根据权利要求2所述的基于差异性代谢物评价牛奶光氧化程度的方法，其特征在于，步骤a)中，所述离心的转速为8×10³～1×10⁴rpm；所述离心的时间为10～30min；和/或，所述有机溶剂选自乙腈、甲醇和水中的一种或多种的混合溶剂；和/或，所述微孔过滤膜的孔径为0.2～0.5μm。

4.根据权利要求3所述的基于差异性代谢物评价牛奶光氧化程度的方法，其特征在于，步骤a)中，所述有机溶剂为乙腈；和/或，所述微孔过滤膜的孔径为0.22μm。

5.根据权利要求1所述的基于差异性代谢物评价牛奶光氧化程度的方法，其特征在于，步骤a)中，所述采集采用高分辨质谱或超高效液相色谱-高分辨质谱进行。

6.根据权利要求5所述的基于差异性代谢物评价牛奶光氧化程度的方法，其特征在于，步骤a)中，所述超高效液相色谱的条件包括：以流动相A和/或流动相B进行梯度洗脱；和/或

正离子模式下，流动相A(v/v)：0.05～0.15％的甲酸-水溶液；流动相B(v/v)：0.05～0.15％的甲酸-乙腈溶液；和/或，负离子模式下，流动相A为3～8mM乙酸胺-水溶液；流动相B为3～8mM乙酸胺-乙腈溶液；和/或

所述梯度洗脱的程序为：正离子模式下，0～5min时，流动相B(v/v)：2％；5～8min时，流动相B(v/v)：2％～10％；8～18min时，流动相B(v/v)：10％～95％；18.1min以后，流动相B(v/v)：100％，并继续平衡1～2min；和/或，负离子模式下，0～5min时，流动相B(v/v)：2％；5～8min时，流动相B(v/v)：2％～10％；8～16min时，流动相B(v/v)：10％～95％；16.1min以后，流动相B(v/v)：100％，并继续平衡1～2min；和/或

所述梯度洗脱的流速为0.2～0.5mL/min。

7.根据权利要求6所述的基于差异性代谢物评价牛奶光氧化程度的方法，其特征在于，步骤a)中，正离子模式下，流动相A(v/v)：0.1％的甲酸-水溶液；流动相B(v/v)：0.1％的甲酸-乙腈溶液；和/或，负离子模式下，流动相A为5mM乙酸胺-水溶液；流动相B为5mM乙酸胺-乙腈溶液；和/或

所述梯度洗脱的流速为0.4mL/min。

8.根据权利要求5所述的基于差异性代谢物评价牛奶光氧化程度的方法，其特征在于，步骤a)中，所述高分辨质谱为高分辨飞行时间质谱仪，所述高分辨质谱的条件包括：采集模式为数据依赖性采集模式；和/或，采用电喷雾离子源，数据采集范围m/z为50～1000Da；和/或，正离子模式下，喷雾电压为4500～6000V；去簇电压为20～120V；负离子模式下，喷雾电压为-5500～-4000V；去簇电压为-20～-120V；和/或，气帘气压力(Curtain Gas，CUR)为15～40psi；喷雾气压力为15～70psi；加热辅助气压力为0～70psii；离子源温度(Temperature，TEM)为450～550℃；碰撞能为35±15eV。