[发明专利]一种夹心免疫试剂盒

权利要求书

1.一种夹心免疫试剂盒，其特征在于，所述夹心免疫试剂盒包括：10ml顶层试剂、10ml底层试剂、10mlBSA溶液和10mLEDTA抗凝剂；

所述顶层试剂包括：金核银壳纳米棒底物、半胱胺修饰分子、戊二醛修饰分子和1×PBS缓冲液；

所述底层试剂包括：金核银壳纳米棒底物、3-巯基-1,2,4-三氮唑拉曼检测分子、戊二醛功能修饰分子；

所述BSA溶液的浓度为1％。

2.根据权利要求1所述夹心免疫试剂盒，其特征在于，所述夹心免疫检测试剂盒的制备方法包括：

(1)制备顶层试剂

(1.1)将2μL浓度为5mmol/L的3-巯基-1,2,4-三氮唑乙醇溶液加入到金核银壳纳米棒溶液中，温和摇动2h，在7000rpm条件下离心10min，去上清液，得到混合物一；

(1.2)将混合物一分散到去离子水中，加入2μL浓度为25％wt的戊二醛溶液，温和摇动1.5h，在6000rpm条件下离心10min，得到混合物二；

(1.3)将混合物二分散到1.0mL浓度为9.0μg/mL in 1×PBS buffer的抗人肌红蛋白多克隆抗体溶液中得到混合溶液，将混合溶液在4℃条件下保存12h，然后在6000rpm条件下离心10min，去上清液，将沉淀分散到1mL1×PBS缓冲液中，得到顶层试剂，在4℃的条件下保存；

(2)制备底层试剂

(2.1)将2μL浓度为25mmol/L的半胱胺溶液加入到1.0mL金核银壳纳米棒溶液中，对其进行氨基功能化处理，处理后用纯净水冲洗，氮气干燥；

(2.2)再加入2μL浓度为25mmol/L的戊二醛溶液对其进行功能化处理，处理后用纯净水冲洗，氮气干燥；

(2.3)将步骤2.2中得到的产物加入到2mL浓度为20μg/mL in 1×PBS buffer的抗人肌红蛋白单克隆抗体溶液中，在4℃下培育12小时，然后用纯净水冲洗，氮气干燥。

3.一种利用权利要求1或2所述的夹心免疫试剂盒检测肌红蛋白抗原的方法，其特征在于，所述方法包括：

(a)阻断非特异性结合

将底层试剂浸入BSA溶液中1h，阻断非特异性结合活性位点，然后用纯净水冲洗，氮气干燥；

(b)固定人肌红蛋白

向步骤(a)处理后的2份底层试剂中分别滴加入200μL测试样品和空白样品，在温室中培育1h，然后用纯净水冲洗，氮气干燥；

(c)形成夹心结构

步骤(b)氮气干燥后，加入顶层试剂，在温室中20min，培育完成后用纯净水冲洗，再用氮气干燥，得到夹心结构；

(d)光谱采集

以785nm激光为激发光源，使用20倍物镜在徕卡显微镜上对上述2份样品进行拉曼光谱采集，光谱在800-1800cm-1范围内，曝光10s。