[发明专利]一种静息细胞多轮发酵制备氢化可的松的方法

权利要求书

1.一种静息细胞多轮发酵制备氢化可的松的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)在蓝色犁头霉发酵菌液中投入RSA进行发酵转化；

(2)步骤(1)发酵转化结束后分离菌丝体，将分离得到的菌丝体加入到水中，再次加入RSA进行静息细胞转化；

(3)重复步骤(2)的步骤，进行静息细胞的多轮转化，直至菌丝体生物酶耗尽，发酵结束。

2.根据权利要求1所述一种静息细胞多轮发酵制备氢化可的松的方法，其特征在于，步骤(1)所述RSA的投加量为2.5-2.8g/L。

3.根据权利要求1或2所述一种静息细胞多轮发酵制备氢化可的松的方法，其特征在于，步骤(1)所述发酵转化的方式为：在25-29℃，160-200rpm条件下，转化30-33h。

4.根据权利要求1或2所述一种静息细胞多轮发酵制备氢化可的松的方法，其特征在于，步骤(2)所述水的用量与步骤(1)所述蓝色犁头霉发酵菌液的体积比为0.75：1～1.1：1。

5.根据权利要求1或2所述一种静息细胞多轮发酵制备氢化可的松的方法，其特征在于，步骤(2)所述RSA的加入量为1.5-2.5g/L；步骤(2)所述水的用量与步骤(1)所述蓝色犁头霉发酵菌液的体积比为1：1。

6.根据权利要求5所述一种静息细胞多轮发酵制备氢化可的松的方法，其特征在于，步骤(2)所述静息细胞转化的方式为：在25-29℃，160-200rpm条件下，转化18-24h。

7.根据权利要求1所述一种静息细胞多轮发酵制备氢化可的松的方法，其特征在于，步骤(1)所述蓝色犁头霉发酵菌液由以下方法制备得到：首先将蓝色犁头霉接种于斜面进行斜面菌种培养，然后将培养得到的菌种接入到液体培养基中培养，液体培养至pH＝3.8-4.4时，培养到达终点，得到所述蓝色犁头霉发酵菌液。

8.根据权利要求7所述一种静息细胞多轮发酵制备氢化可的松的方法，其特征在于，所述斜面菌种培养的方式为：培养基为PDA培养基，培养温度为25-29℃，培养周期为7～9天，此时孢子成熟；所述液体培养基中培养的温度为25～29℃，转速为160-200rpm；所述液体培养基的组成为：葡萄糖1.0～1.2％、玉米浆1.0～1.5％、酵母膏0.3～0.5％、硫酸铵0.4～0.6％，其余为水；PH＝6.1-6.5。

9.根据权利要求1所述一种静息细胞多轮发酵制备氢化可的松的方法，其特征在于，步骤(3)所述多轮转化为2～10轮转化；步骤(2)所述水在使用之前经过了灭菌处理。

10.根据权利要求9所述一种静息细胞多轮发酵制备氢化可的松的方法，其特征在于，步骤(1)和步骤(2)RSA的投料方式为：经助溶剂乙醇回流溶解投入；所述灭菌处理为100℃煮沸灭菌。