[发明专利]抗菌多肽复合物及其制备方法和应用

说明书

一种抗菌多肽复合物，为MSN@T7E21R‑HD5@SC，其中包括抗菌衍生肽T7E21R‑HD5，T7E21R‑HD5的氨基酸序列为ATCYCRRGRCATRESLSGVCRISGRLYRLCCR(Cys3‑Cys31/Cys5‑Cys20/Cys10‑Cys30)。E21R突变可增强HD5的抗菌性，T7R突变不仅可以进一步强化E21R‑HD5的抗菌活性，还能恢复单体肽的聚合作用，致使T7E21R‑HD5突变肽在高浓度盐溶液和血清中依然保持高效抗菌性，MSN负载可以保护进入介孔里面的多肽，而SCN包裹MSN可以起到肠道定向释放的功能，利于药物的有效吸收，能够充分发挥HD5的抗HPV作用，有效防治HPV感染，可用于预防或治疗人乳头瘤病毒。

技术领域

本发明涉及抗体药物的技术领域，更具体地说涉及一种抗菌多肽复合物及其制备方法和应用。

背景技术

人乳头瘤病毒（HPV）已被确定为全球约5％的癌症的原因。HPV感染几乎与所有宫颈癌和肛门生殖器（外阴，阴道，阴茎和肛门）和口咽癌相关其高风险类型包括HPV16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58等。持续性感染高危型HPV可明确预测女性患宫颈癌的风险。但感染高危型人乳头瘤病毒（HR-HPV）是宫颈癌的必要但不充分的原因，还需有驱动细胞恶性转化的额外病毒和宿主的遗传事件。HPV生命周期始于感染宫颈上皮细胞基底层。在正常的病毒的生命周期中，HPV基因组以游离的状态存在，并被认为在鳞状上皮的基底细胞中以每细胞约50-100拷贝的形式保留。病毒致癌基因E6和E7的表达是被严格调控，高水平的表达致癌基因E6、E7仅上皮细胞分化后。病毒致癌基因可诱导细胞周期不定期重新进入S期，激活宿主复制机制，在病毒粒子合成之前扩增病毒基因组。此时病毒癌基因的表达不会造成致癌威胁，因为这些细胞可以从宫颈鳞状上皮细胞中丢失。宫颈瘤变进展需要空间和量化上对这种严格调控转录的解除，使得病毒癌基因在整个上皮高水平表达。致癌基因长时间被保留在宫颈上皮内，因此可代表致癌因素靶细胞，其可诱导染色体高度不稳定性以驱动朝向恶性发展。

人α防御素-5（HD5），主要由肠道Paneth细胞和女性生殖道粘膜上皮细胞表达和分泌，另外在尿道上皮组织中也检测到的HD5的存在。正是由于这些区域经常受到外来微生物的侵入，环境选择导致的进化压力造就了HD5具有突出的抗病原微生物活性，因此更具开发应用价值。

发明内容

本发明克服了现有技术中的不足，提供了一种抗菌多肽复合物及其制备方法和应用。

本发明的目的通过下述技术方案予以实现。

本发明的抗菌多肽复合物，为MSN@T7E21R-HD5@SC，其中包括抗菌衍生肽T7E21R-HD5，T7E21R-HD5的氨基酸序列为ATCYCRRGRCATRESLSGVCRISGRLYRLCCR (Cys3-Cys31/Cys5-Cys20/Cys10-Cys30)，含有三对二硫键，带7个正电荷，其分子量为 3664.0 Da；6个半胱氨酸两两配对形成三对定向搭配的分子间二硫键；介孔二氧化硅纳米粒子MSN通过静电吸附作用负载T7E21R-HD5抗菌肽，琥珀酰酪蛋白SCN包裹在介孔二氧化硅纳米粒子MSNs之外。

本发明的抗菌多肽复合物的制备方法，包括以下步骤：

a.称取0.068g三乙醇胺TEA溶于25mL去离子水中，80℃搅拌30min；

b.加入0.38g溴化十六烷基三甲胺CTAB继续搅拌1h；

c.向上述溶液中加入4mL正硅酸乙酯TEOS搅拌2h；

d.12000rpm离心15min收集反应产物，去离子水和乙醇各洗三次；

e.样品加入到含1%硝酸铵的乙醇80℃回流40min，以去除CTAB；

f.12000rpm离心15min收集反应产物，去离子水和乙醇各洗三次，真空干燥4℃

保存备用；

g.取100μL浓度为1mg/mL的T7E21R-HD5溶液加到含20μgMSN的溶液中，4℃震荡孵育过夜；