[发明专利]一种葡萄糖发酵乳酸中发酵液残糖的检验方法

权利要求书

1.一种葡萄糖发酵乳酸中发酵液残糖的检验方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一：提取离心发酵液上清液A，待葡萄糖发酵乳酸发酵35h时，取发酵液20ml放入离心机内，在转速为3200～3800r/min的离心条件下，离心4～6min，获得上清液A；

步骤二：稀释上清液A，将步骤一制得的上清液A，进行5-50倍数的稀释，放置入生物传感仪检测葡萄糖浓度；

步骤三：滴定实验，参照生物传感仪葡萄糖浓度做滴定；

1)空白滴定，在干燥的250mL锥形瓶中加水10mL、20％KOH试液3mL、钙黄绿素指示剂22mg，用0.05mol/L的EDTA标准滴定溶液滴定，背光观察，当黄绿色荧光转变为橙色时即达终点停止滴定；再精确加入碱性酒石酸铜试剂乙、甲液各5mL，玻璃珠数颗，再预加入1g/L的葡萄糖标准溶液10mL，摇匀置于电炉加热使其在2分钟内沸腾，沸腾30秒后，匀速滴入葡萄糖标准溶液至紫色消失并保证整个过程3分钟内滴定完毕，记录沸腾前后共耗用葡萄糖标准溶液的毫升值V0；

2)预备滴定，精密吸取发酵液0.20mL，加水10mL、20％KOH试液3mL、钙黄绿素指示剂22mg，用0.05mol/L的EDTA标准滴定溶液滴定，背光观察，当黄绿色荧光转变为橙色时即达终点停止滴定。再精确加入碱性酒石酸铜试剂乙、甲液各5mL，玻璃珠数颗，根据生物传感仪葡萄糖含量的高低预加合适的葡萄糖标准溶液数毫升8mL，摇匀置于电炉上加热使其在2分钟内沸腾，沸腾30秒后，用葡萄糖标准溶液1g/L匀速滴定至紫色消失并保证整个过程3分钟内滴定完毕，记录沸腾前后消耗葡萄糖标准溶液的毫升值Vm做正式滴定参考用；

3)正式滴定，精密吸取发酵液0.20mL，加水10mL、20％KOH试液3mL、钙黄绿素指示剂20mg，用0.05mol/L的EDTA标准滴定溶液滴定，背光观察，当黄绿色荧光转变为橙色时即达终点停止滴定；再精确加入碱性酒石酸铜试剂乙、甲液各5mL，玻璃珠数颗，加入比正式滴定耗用量Vm少1mL的葡萄糖标准溶液，摇匀置于电炉上加热使其在2分钟内沸腾，沸腾30秒后，用葡萄糖标准溶液匀速滴定至紫色消失并保证整个过程3分钟内滴定完毕，记录沸腾前后消耗葡萄糖标准溶液的毫升数V；

步骤四，浓度计算，当发酵液中还原糖含量≤2.5％时，S＝(V0-V)/0.2×0.1；

其中，S--葡萄糖含量，％；V0--空白滴定消耗葡萄糖标准液的毫升数，mL；

V--正式滴定消耗葡萄糖标准液的毫升数，mL；0.2--预加发酵液原液的毫升数，mL。

2.根据权利要求1所述的一种葡萄糖发酵乳酸中发酵液残糖的检验方法，其特征在于：所述步骤一中离心转速为3500r/min，离心时间为5min。

3.根据权利要求1所述的一种葡萄糖发酵乳酸中发酵液残糖的检验方法，其特征在于：所述步骤二中，用移液管精确吸取上清液后，进行10倍数的稀释。

4.根据权利要求1所述的一种葡萄糖发酵乳酸中发酵液残糖的检验方法，其特征在于：所述步骤三中，钙黄绿素指示剂以重量份数计，由1份钙黄绿素、100份氯化钠混合研磨而成。