[发明专利]一种葡萄糖发酵乳酸中发酵液残糖的检验方法

说明书

本发明公开了一种葡萄糖发酵乳酸中发酵液残糖的检验方法，涉及乳酸检测方法领域，包括步骤一：提取离心发酵液上清液A；步骤二：稀释上清液A，将步骤一制得的上清液A，进行5‑50倍数的稀释，放置入生物传感仪检测葡萄糖浓度；步骤三：滴定实验，参照生物传感仪葡萄糖浓度做滴定；步骤四，浓度计算，当发酵液中还原糖含量≤2.5％时，S＝(V0‑V)/0.2×0.1，可大幅度提高葡萄糖发酵乳酸中发酵液残糖含量的准确性和平行性。

技术领域

本发明涉及乳酸检测方法领域，尤其涉及一种用于检测葡萄糖发酵乳酸中发酵液残糖的方法。

背景技术

乳酸(2-羟基丙酸)是一种化合物，生产方法多为细菌发酵法，发酵法的原料一般是玉米淀粉，甘薯淀粉，大米淀粉，也有纤维素等作为原料，主要途径是糖在乳酸菌作用下调节pH6左右，发酵周期35-40小时，,在乳酸菌发酵产生乳酸的过程中，通过对发酵液中残糖的测定，可以控制最佳发酵结束时间，目前对发酵液中残糖量的测定方法费林定糖法，费林定糖法中费林氏与还原糖反应受溶液酸碱度、加热温度、搅拌力度、蒸发量、滴定速度等因素影响，而且滴定终点的判断受人为因素影响较大，同时发酵液中的色度及酸碱度会影响费林定糖法的终点判读，影响测定结果的准确性。

发明内容

本发明的目的在于解决现有发酵液中残糖量的测定方法不准确的问题，提供一种葡萄糖发酵乳酸中发酵液残糖的检验方法，可大幅度提高葡萄糖发酵乳酸中发酵液残糖含量的准确性和平行性。

为了实现以上目的，本发明采用的技术方案是：

一种葡萄糖发酵乳酸中发酵液残糖的检验方法，包括以下步骤：

步骤一：提取离心发酵液上清液A，待葡萄糖发酵乳酸发酵35h时，取发酵液20ml放入离心机内，在转速为3200～3800r/min的离心条件下，离心4～6min，获得上清液A；离心的目的是因为发酵液较浑浊，直接用发酵液稀释会影响生物传感分析仪的检测结果，更会堵塞管道。

步骤二：稀释上清液A，将步骤一制得的上清液A，进行5-50倍数的稀释，放置入生物传感分析仪检测葡萄糖浓度；因生物传感仪的检测葡萄糖浓度范围在1g/L,稀释在仪器的检测范围才能使得检测结果误差在0.2％以下。

步骤三：滴定实验，参照生物传感仪检测的葡萄糖浓度来做滴定；

1)空白滴定，在干燥的250mL锥形瓶中加水10mL、20％KOH试液3mL、钙黄绿素指示剂22mg，用0.05mol/L的EDTA(乙二胺四乙酸二钠)标准滴定溶液滴定，背光观察，当黄绿色荧光转变为橙色时即达终点停止滴定；再精确加入碱性酒石酸铜试剂乙、甲液各5mL，玻璃珠数颗，再预加入1g/L的葡萄糖标准溶液10mL，摇匀置于电炉加热使其在2分钟内沸腾，沸腾30秒后，匀速滴入葡萄糖标准溶液直到由蓝色变成无色，即为滴定终点。要保证整个滴定过程3分钟内完成，记录沸腾前后共耗用1g/L葡萄糖标准溶液的毫升值V0；

2)预备滴定，精密吸取发酵液0.20mL，加水10mL、20％KOH试液3mL、钙黄绿素指示剂22mg，用0.05mol/L的EDTA(乙二胺四乙酸二钠)标准滴定溶液滴定，背光观察，当黄绿色荧光转变为橙色时即达终点停止滴定。再精确加入碱性酒石酸铜试剂乙、甲液各5mL，玻璃珠数颗，根据生物传感仪葡萄糖含量的高低预加合适的葡萄糖标准溶液数毫升8mL，摇匀置于电炉上加热使其在2分钟内沸腾，沸腾30秒后，用葡萄糖标准溶液1g/L匀速滴定直到由蓝色变成无色，即为滴定终点。要保证整个滴定过程3分钟内完成，记录沸腾前后共耗用1g/L葡萄糖标准溶液的毫升值Vm做用来正式滴定参考用；