[发明专利]一种热提取结合分散固相萃取测定鲜烟叶中硝酸根与亚硝酸根的方法

说明书

本发明公开了一种热提取结合分散固相萃取测定鲜烟叶中硝酸根与亚硝酸根的方法，包括如下步骤：鲜烟叶低温冷冻干燥后将其研磨成粉末，鲜烟叶中的硝酸根与亚硝酸利用稀碱性溶液与分散固相萃取进行同步萃取与净化，提取净化液离心过滤后直接利用离子相互作用反相液相色谱‑二极管阵列检测器进行定性与定量分析，采用保留时间定性，外标法定量。本发明与其他分析方法相比，具有分离能力强、分析速度快、干扰低、准确度与灵敏度高的特点，特别是水浴加热与涡旋振荡提取结合能有效减少方法前处理的提取时间与提取效率，稀碱性溶液能有效稳定亚硝酸根，活性炭分散固相萃取基质能有效去除干扰物，从而提高其分析准确性，离子相互作用反相液相色谱的应用，也有效增加了目标物的分离能力与保留能力。

技术领域

本发明涉及鲜烟叶中硝酸根与亚硝酸根的测定方法，特别指出一种稀碱性溶液热提取结合分散固相萃取净化的前处理方法。

背景技术

氮素的吸收、同化与利用在烟草的代谢中有着极其重要的地位，关系着烟草的生长、发育、产量和品质。氮素的同化过程是烟草最基本的同化过程之一。烟草利用的氮源一般可分为硝态氮和氨态氮两种。烟草可以直接吸收氨态氮，也可以在吸收硝态氮后将其还原成氨态氮。硝酸盐是烟草生长重要的氮素来源，通过硝酸还原酶的作用转变为亚硝酸盐，再通过亚硝酸还原酶的作用转变成氮循环的重要原料-铵，然后被同化成氨基酸再参与体内的各种代谢生理活动，从而调节氮代谢，并影响到光合碳代谢，进而影响烟草的生长。同时硝酸盐和亚硝酸盐作为烟草中一类重要的含氮化合物，其含量的多少不但直接影响烟叶的吃味和品质还会影响其他含氮化合物的形成和含量。其中，亚硝酸盐的含量与主流烟气中氨的释放量成显著正相关，从而影响烟气的pH值；亚硝酸盐也是烟草特有亚硝胺的直接前体物，它的含量与烟草特有亚硝胺的含量呈显著相关。目前，对硝酸根与亚硝酸根定量分析的研究主要集中在对不同类型烟叶、烟用香精香料与卷烟纸等基质进行检测，而对鲜烟叶中硝酸根与亚硝酸根的定量检测技术方法未见报道，鲜烟叶中的硝酸根与亚硝酸根不仅与氮素吸收相关，同时也决定这烤烟中特有亚硝胺、烟气pH值等关键指标。因此，同时测定鲜烟叶中硝酸根与亚硝酸根含量具有十分重要的意义。

现有对硝酸根与亚硝酸根的检测方法主要有光谱法、色谱法、电化学法与极谱法等，其中色谱法具有专一性强、稳定性好，灵敏度高，结果准确可靠的特点。色谱法中主要包括液相色谱，离子色谱与气相色谱等。在液相色谱流动相中添加剂选择合适的情况下，高效液相色谱的理论柱效率要优于离子色谱，且离子色谱易出现不对称峰形与受到氯离子的干扰。气相色谱法需要复杂的衍生程序，耗时且试剂成本较高。在样品前处理方面，硝酸根与亚硝酸根一般采用水提取，有机溶剂萃取与滤膜净化，但亚硝酸根在中性与酸性提取条件下稳定性低，易转化为硝酸根与一氧化氮，且有机溶剂萃取与滤膜净化的能力相对较差。因此非常必要建立一套有效的样品前处理与检测方法同时测定鲜烟叶中的硝酸根与亚硝酸根，该方法具有分离能力强、分析速度快、干扰低、准确度与灵敏度高的特点，能够为烟叶的氮素转化与烟草安全性评价等提供科学依据。

发明内容

针对现有技术存在的不足之处，本发明提供一种稀碱性溶液热提取结合分散固相萃取净化，离子相互作用反相液相色谱-二极管阵列检测器同时分离、定量硝酸根与亚硝酸根的方法。该方法解决了亚硝酸根在中性与酸性提取条件下稳定性低，样品净化效果差的前处理技术问题，结合离子相互作用反相液相色谱检测，该方法具有分离能力强、分析速度快、干扰低、准确度与灵敏度高的特点，能同时定性与定量分析鲜烟叶中的硝酸根与亚硝酸根。

本发明的技术方案是：一种热提取结合分散固相萃取测定鲜烟叶中硝酸根与亚硝酸根的方法，包括以下步骤：

S1鲜烟叶样品的预处理：先将采集的鲜烟叶样品进行液氮速冻处理，然后采用低温冷冻干燥法干燥，干燥后将其研磨成粉末，得鲜烟叶样品粉末备用；

S2鲜烟叶样品中硝酸根与亚硝酸根的提取与净化：称取一定量的鲜烟叶样品，同时加入稀碱性溶液与分散固相萃取基质，采用热提取结合分散固相萃取的方法同时进行提取与净化样品中的硝酸根与亚硝酸根；