[发明专利]一种通过打散CTC细胞团抑制肿瘤转移的方法

权利要求书

1.一种通过打散CTC细胞团抑制肿瘤转移的纳米系统，其特征在于：所述纳米系统是由用于打散CTC细胞团的药物乌本苷和用于负载药物的外泌体构建成的基于外泌体负载乌本苷的纳米制剂、所述基于外泌体负载乌本苷的纳米制剂通过以下步骤制备获得：

S1：采用基于阴离子交换磁珠的外泌体分离技术从牛奶中提取外泌体；

S2：外泌体的鉴定与表征；

S3：外泌体表面修饰iRGD得到靶向修饰的外泌体；

S4：评价iRGD修饰的外泌体的肿瘤靶向性；

S5：电穿孔将乌本苷导入外泌体；

所述采用基于阴离子交换磁珠的外泌体分离技术从牛奶中提取外泌体包括：将阴离子交换磁珠与新鲜牛奶进行孵育，使带正电的阴离子交换磁珠与带负电的外泌体充分结合；然后用低浓度的盐溶液冲洗掉带正电或不带电的蛋白、核酸、脂质和细胞碎片杂质；最后用高浓度的NaCl溶液进行洗脱，高浓度的Cl^-可以将外泌体从阴离子交换磁珠表面置换下来，通过收集洗脱液，得到外泌体；

所述外泌体表面修饰iRGD得到靶向修饰的外泌体包括：在外泌体溶液中加入Sulfo-EMCS交联剂，调节pH至7.0，室温反应2小时，使N-羟基琥珀酰亚胺酯与外泌体表面蛋白通过伯胺反应形成酰胺键，然后利用50kD超滤管超滤3次去除未反应的EMCS，最后将外泌体-EMCS与iRGD多肽混合，使iRGD的终浓度为0.5 mM，调节pH至7.0，室温反应2小时，使马来酰亚胺与iRGD的半胱氨酸通过巯基反应形成稳定的硫醚键，并用50kD超滤管超滤3次，除去游离的iRGD，从而得到iRGD修饰的外泌体iRGD-EXO；

所述电穿孔将乌本苷导入外泌体包括：将乌本苷溶液加入iRGD-EXO中，加入电转缓冲液调节电阻至30~50欧，然后将混合液加入电转杯中，施加电穿孔信号，在外泌体膜上打孔，然后施加电转移信号，使乌本苷沿着电势差流入外泌体，将所得混合液在37℃孵育30分钟，使外泌体的膜得到充分修复，最后在4℃运用50kD超滤管超滤 3 次，除去游离的乌本苷，从而得到负载乌本苷的iRGD-EXO。

2.根据权利要求1所述的一种通过打散CTC细胞团抑制肿瘤转移的纳米系统，其特征在于：所述纳米制剂为脂质体、金纳米颗粒、磁纳米颗粒中的任一种。