[发明专利]一种通过打散CTC细胞团抑制肿瘤转移的方法

说明书

本发明公开了一种通过打散CTC细胞团抑制肿瘤转移的方法，涉及医疗技术领域，包括构建一个基于外泌体负载乌本苷的纳米制剂、体外实验评价基于外泌体负载乌本苷的纳米制剂打散CTC簇的效果和体内实验评价基于外泌体负载乌本苷的纳米制剂打散CTC簇和抑制肿瘤转移的效果；本发明通过在外泌体表面修饰肿瘤特异性多肽iRGD，使外泌体可以与CTCs细胞表面的αvβ3整合素特异性结合，从而提高外泌体靶向CTCs的能力；通过利用电穿孔的方法将乌本苷导入外泌体，有助于提高乌本苷在水中的溶解度，改善乌本苷的剂型，降低乌本苷的毒副作用；通过运用基于外泌体负载乌本苷的纳米制剂通过打散血液中的CTC细胞团来抑制肿瘤转移。

技术领域

本发明涉及医疗技术领域，具体为一种通过打散CTC细胞团抑制肿瘤转移的方法。

背景技术

近十几年来，肿瘤的发病率迅速上升，已成为全世界发病率排名第一位的女性恶性肿瘤，对全世界女性的生命健康造成了严重威胁。肿瘤转移是导致肿瘤患者死亡的主要原因之一。据报道，肿瘤造成的死亡病例中，有90％要归因于肿瘤转移。肿瘤转移主要发生在肺、骨、脑和淋巴结等部位，其中60-70％的肿瘤患者死亡时均发生了肺转移。迄今为止，手术切除、化学疗法、放射疗法和靶向疗法被认为是治疗肿瘤的主要手段。对于早期的肿瘤可以采用手术切除的手段进行治疗，然而对于已经发生转移的肿瘤，目前尚无有效地治疗策略可以明显延长患者生存期。传统的化疗药物可以抑制癌细胞的增殖，但是具有比较严重的毒副作用，而且容易诱发肿瘤耐药。因此，如何有效抑制肿瘤转移是肿瘤治疗中亟待解决的关键问题。

美国麻省总医院癌症中心的Daniel A.Haber团队通过原位肿瘤荷瘤模型实验发现：大约一半肿瘤的肺转移灶都是由CTC簇引发的。CTC簇的转移潜能比单个CTC高25-50倍，因此CTC簇是肿瘤转移的关键。打散CTC簇，可以使之失去转移的能力，进而抑制肿瘤细胞的转移和扩散,因此，本发明提出一种通过打散CTC细胞团抑制肿瘤转移的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种通过打散CTC细胞团抑制肿瘤转移的方法，通过在外泌体表面修饰肿瘤特异性多肽iRGD，使外泌体可以与CTCs细胞表面的αvβ3整合素特异性结合，从而提高外泌体靶向CTCs的能力；通过利用电穿孔的方法将乌本苷导入外泌体，有助于提高乌本苷在水中的溶解度，改善乌本苷的剂型，降低乌本苷的毒副作用；通过运用基于外泌体负载乌本苷的纳米制剂通过打散血液中的CTC细胞团来抑制肿瘤转移。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种通过打散CTC细胞团抑制肿瘤转移的方法，其特征在于：包括构建一个基于外泌体负载乌本苷的纳米制剂、体外实验评价基于外泌体负载乌本苷的纳米制剂打散CTC簇的效果和体内实验评价基于外泌体负载乌本苷的纳米制剂打散CTC簇和抑制肿瘤转移的效果；所述构建一个基于外泌体负载乌本苷的纳米制剂包括以下步骤：

S1：采用基于阴离子交换磁珠的外泌体分离技术从牛奶中提取外泌体；

S2：外泌体的鉴定与表征；

S3：外泌体表面修饰iRGD得到靶向修饰的外泌体；

S4：评价iRGD修饰的外泌体的肿瘤靶向性；

S5：电穿孔将乌本苷导入外泌体。

优选的，所述体外实验评价基于外泌体负载乌本苷的纳米制剂打散CTC簇的效果包括以下步骤：

S1:体外形成CTC簇及其表征；

S2:体外实验评价基于外泌体负载乌本苷的纳米制剂打散CTC簇的效果。

优选的，所述体内实验评价基于外泌体负载乌本苷的纳米制剂打散CTC簇和抑制肿瘤转移的效果包括以下步骤：

S1：构建原位肿瘤荷瘤模型；

S2:评价基于外泌体负载乌本苷的纳米制剂打散血液中CTC簇的效果；