[发明专利]一种糖基转移酶突变体及其应用

权利要求书

1.一种糖基转移酶突变体，其特征在于，所述糖基转移酶突变体的氨基酸序列如SEQID NO.4所示。

2.根据权利要求1所述的糖基转移酶突变体，其特征在于，所述糖基转移酶突变体由来源于葛根(Pueraria lobata)的野生型糖基转移酶氨基酸序列SEQ ID NO.1中的第196位苯丙氨酸突变为酪氨酸获得。

3.一种编码基因，其特征在于，所述编码基因编码权利要求1或2所述糖基转移酶突变体。

4.根据权利要求3所述的编码基因，其特征在于，所述编码基因的核苷酸序列如SEQ IDNO.5所示。

5.一种重组载体，其特征在于，包含权利要求3或4所述编码基因。

6.一种基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌包含权利要求3或4所述编码基因。

7.根据权利要求6所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌由权利要求5所述重组载体转化到大肠杆菌感受态细胞表达获得。

8.权利要求1或2所述糖基转移酶突变体在葛根素生物合成反应中的用途，其特征在于，所述生物合成反应中糖基转移酶突变体生物催化大豆素碳苷糖基化反应合成葛根素，所述合成反应中大豆素为原料，UDPG为辅酶，糖基转移酶突变体作用于大豆素C8位，反应式：

9.权利要求6或7所述基因工程菌在葛根素生物合成反应中的用途，其特征在于，所述生物合成反应中基因工程菌生物催化大豆素碳苷糖基化反应合成葛根素，所述合成反应中大豆素为原料，UDPG为辅酶，基因工程菌作用于大豆素C8位。

10.一种合成葛根素的方法，其特征在于，通过以下步骤实现：

以大豆素为原料，以UDPG为辅酶，在生物催化剂催化下，于缓冲溶液中进行糖基化反应，所述UDPG反应后脱去糖基形成UDP，所述生物催化剂为权利要求1或2所述糖基转移酶突变体、权利要求6或7所述基因工程菌中任一种。

11.根据权利要求10所述合成葛根素的方法，其特征在于，所述大豆素的添加量为0.1～30mM，反应温度为25～35℃，控制反应的pH值为7～9，反应时间为0.5～24h，糖基转移酶突变体添加量为1～5mg/mL，UDPG添加量为0.15～45mM；若糖基转移酶突变体替换为基因工程菌，则基因工程菌添加量为5～50g cdw/L。

12.根据权利要求10所述合成葛根素的方法，其特征在于，所述UDP通过辅酶再生系统再生为UDPG，所述辅酶再生系统包含辅酶再生酶、辅酶再生底物。

13.根据权利要求12所述合成葛根素的方法，其特征在于，所述辅酶再生酶为蔗糖合成酶，所述辅酶再生底物为蔗糖；大豆素的添加量为0.1～30mM，蔗糖的添加量为0.15～45mM，糖基转移酶突变体、蔗糖合成酶的添加量分别为1～5mg/mL，反应温度为25～35℃，控制反应的pH值为7～9，反应时间为0.5～24h；若糖基转移酶突变体替换为基因工程菌，则基因工程菌添加量为5～50g cdw/L。