[发明专利]一种扩增NK细胞的培养体系及其培养方法

权利要求书

1.一种扩增NK细胞的培养体系，其特征在于，包括NK细胞无血清培养基、组分1、组分2和组分3；

所述NK细胞无血清培养基为含白蛋白和抗生素的NK细胞基础培养基；

所述组分1包括基质、CD14、CD19、CD86和CD137L；

所述组分2包括基质、IL12、IL15和IL21；

所述组分3包括基质、IL2和3,4,5-三羟基苯甲酸。

2.根据权利要求1所述的培养体系，其特征在于，所述NK细胞无血清培养基为含1～9％v/v白蛋白和20～100U/ml抗生素的NK细胞基础培养基；

所述组分1包括基质和摩尔比为(0.5～1.5):(0.5～1.5):(0.5～1.5):(1.2～2.4)的CD14、CD19、CD86和CD137L；

所述组分2包括基质和摩尔比为(0.5～1.5):(0.6～1.8):(2～10)的IL12、IL15、IL21；

所述组分3包括基质、100～500U/ml IL2和10～40μg/ml 3,4,5-三羟基苯甲酸。

3.根据权利要求1所述的培养体系，其特征在于，所述组分1中，CD14、CD19、CD86和CD137L的总含量为150U/ml；

所述组分2中，IL12、IL15和IL21的总含量为200U/ml。

4.根据权利要求1所述的培养体系，其特征在于，所述组分1～3中基质选自生理盐水或PBS缓冲液。

5.根据权利要求1～4任一项所述的培养体系，其特征在于，所述NK细胞基础培养基为KBM581培养液。

6.根据权利要求1～5任一项所述的培养体系，其特征在于，所述抗生素选自庆大霉素、卡那霉素、青霉素中的至少一种。

7.权利要求1～6任一项所述的培养体系在扩增NK细胞中的应用。

8.一种NK细胞的培养方法，其特征在于，利用权利要求1～6任一项所述培养体系培养中的NK细胞无血清培养基、组分1～3培养PBMC或NK细胞，包括以下步骤：

将PBMC或NK细胞接种至所述不加白蛋白的NK细胞无血清培养基中，加入所述NK细胞无血清培养基中的白蛋白成分和所述组分1；培养3～7天，更换不加白蛋白的NK细胞无血清培养基，依次加入NK细胞无血清培养基中的白蛋白成分以及所述组分2、组分3，转移至细胞培养袋中，补加所述NK细胞无血清培养基，继续培养13-15天，收集细胞。

9.根据权利要求7所述的培养方法，其特征在于，在更换不加白蛋白的NK细胞无血清培养基后，在加入NK细胞无血清培养基中的白蛋白成分之前还包括37℃温浴的步骤。

10.根据权利要求7所述的培养方法，其特征在于，所述PBMC的接种密度为2×10³～2×10¹⁰Cell/ml。