[发明专利]一种新型基因编辑工具的设计及其使用方法

权利要求书

1.递送本专利的人类基因组编辑工具到人类和小鼠细胞的方式包括：纳米粒子递送，特别是脂质体(liposome)，脂质纳米粒子(lipid nanoparticle)，多聚合物纳米粒子(polymernanoparticle)和脂质多聚合纳米粒子(lipid-polymer hybridnanoparticle)。

2.如权利要求1所述的递送方法，递送到细胞中的人类基因组编辑工具是SEQ ID NO.1蛋白质序列。

3.如权利要求1所述，本专利基因组编辑器适用的细胞包括：人类和小鼠T细胞，HEK293T，人类和小鼠神经细胞，人类造血干细胞(HPSCs)。

4.如权利要求1所述，本专利基因组编辑工具由一种融合蛋白和特殊设计的RTgRNA构成，融合蛋白包含以下一条或者多条特征：

a.整个融合蛋白由改造过的AsCpf1和改造过的逆转录酶(以下简称RT)这两个必要蛋白构成；

b.整个融合蛋白的N端(以下简称为N-term)或C端(以下简称为C-term)，至少一端拥有一个核定位信号(以下简称为NLS)；

c.整个融合蛋白含有一段由甘氨酸(G)和丝氨酸(S)组成的GSlinker氨基酸链，无论GSlinker区怎样加入其它氨基酸或者改变氨基酸的排列方式，linker本生由甘氨酸加丝氨酸构成，其长度在10到400个氨基酸以内，G加S在整个GS linker氨基酸链中的比例在50％～100％之间，GS linker主要放到改造过的AsCpf1和RT之间；

d.整个融合蛋白氨基酸链上改造过的AsCpf1和RT从N-term到C-term的组合顺序可以是:Cas-RT，也可以是RT-Cas。

5.如权利要求4所述，与整个融合蛋白搭配的RTgRNA其结构模式可以是：

a.5’ARTgRNA，即5’–templates–RBS–flexible linker–gRNA scaffold–gRNA-3’；

b.3’ARTgRNA，即3’–gRNA scaffold–gRNA–template–RBS–5’。