[发明专利]一种马铃薯蛋白水解物，制备及在贴壁细胞培养中的应用

说明书

本发明涉及生物制药技术领域，具体涉及到一种马铃薯蛋白水解物，制备及在贴壁细胞培养中的应用。其包含复合活性多肽和氨基酸；所述氨基酸的含量至少为25wt％。本发明中对马铃薯蛋白水解物制备工艺进行优化改进的同时，通过分离浓缩的方法获得了小于5kD组分，应用于MDCK贴壁细胞培养，通过检测鉴定寻找到16种肽段，这16种肽段是促细胞增殖的主要肽段。为马铃薯蛋白高值化利用提供新思路，同时为开发马铃薯蛋白水解物替代部分血清培养基提供参考。

技术领域

本发明涉及生物制药技术领域，具体涉及到一种马铃薯蛋白水解物，制备及在贴壁细胞培养中的应用。

背景技术

随着生物科学研究的快速发展，低血清培养已成为一个研究热点，有着广泛的应用前景。通过对细胞营养与代谢和外源蛋白表达机制等机理的深入研究，将进一步促进无血清培养基的开发，使细胞培养技术在生物制备、疫苗工程、细胞等领域得到更广泛的应用。目前，在对细胞进行培养时，大多数情况下会在培养基中加入一定比例的血清以提供细胞生长所需的营养和各种生长因子，而马铃薯蛋白含丰富的蛋白质、粗纤维、碳水化合物，具有19种均衡的氨基酸组分，其水解产物能为细胞提供有益的营养物质，可以改变细胞生长环境，改善生长状况，对细胞代谢、生长、凋亡等生命活动产生调控作用。

发明内容

针对上述技术问题，本发明的第一方面提供了一种马铃薯蛋白水解物，其包含复合活性多肽和氨基酸；所述氨基酸的含量至少为25wt%。

作为本发明一种优选的技术方案，所述复合活性多肽至少包含具有如下氨基酸序列的多肽：

SEQ ID No 1：GQLIVVPQNF

SEQ ID No 2：QLIVVPQNF

SEQ ID No 3：IDPGDSDIIK

SEQ ID No 4：GGGGGYGGGGGYGGGGGGGYGGGR

SEQ ID No 5：VPTVDVSVVDL

SEQ ID No 6：NPEEIPWG

SEQ ID No 7：APGKPPVDY

SEQ ID No 8：APIDVVVPPGNTGLDPS。

作为本发明一种优选的技术方案，所述复合活性多肽还包含具有如下氨基酸序列的多肽：

SEQ ID No 9：PPVLPPQE

SEQ ID No 10：VPELGPDVNF

SEQ ID No 11：GEGTNTWDRFE。

作为本发明一种优选的技术方案，所述氨基酸至少包含氨基酸组合；所述氨基酸组合由丝氨酸、谷氨酸、缬氨酸、亮氨酸、酪氨酸、氨基丁酸、组氨酸、脯氨酸、谷氨酰胺组成；所述氨基酸组合的含量至少占所述马铃薯蛋白水解物质量的18wt%。

本发明的第二个方面提供了一种如上所述的马铃薯蛋白水解物的制备方法，其包括如下步骤：

（1）底物配制：取马铃薯蛋白粉置于反应釜中，加入纯水搅拌溶解得到马铃薯蛋白粉溶液；

（2）酶解：在上述马铃薯蛋白粉中加入蛋白酶，搅拌混匀之后加入0.1M/L HCl调节pH至5.5~7.5，设置温度至40~60摄氏度，酶解反应3~8小时；

（3）灭活：对上述酶解后的体系升温至至少95摄氏度以上，处理至少15min，然后冷却至室温收集粗制水解液；

（4）后处理：对所述粗制水解液进行离心收集上层清液，并对改采用超滤膜过滤得到精制水解液，干燥，即得。