[发明专利]一种中药肉桂冷冻切片的制作方法

权利要求书

1.一种中药肉桂冷冻切片的制作方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一，材料前处理：将中药肉桂样品浸泡在含有70％乙醇与水按照体积比为1～2：1的溶液中1～2小时；取出，切成长5～8mm，宽5～8mm的短段样品；将所述短段样品再浸泡2～3小时，取出，擦干，并放入装有水合氯醛试液的试管中，加热至沸腾5～7次；将所述短段样品取出，擦干；

步骤二，样品固定：采用OCT冷冻包埋剂将所述短段样品固定在冷台底座上；

步骤三，冷冻切片：将冷冻切片机专用刀片水平固定住，然后将粘有短段样品的冷台固定在冷冻切片机的冷台固定槽上；先对短段样品进行修片，待能够出现平整均匀的切片后调至切片厚度为30～40μm，将防卷板调整到适宜位置，摇动旋转手轮进行切片；

步骤四，展片与制片。

2.根据权利要求1所述的制作方法，其特征在于，所述中药肉桂样品的大小为1×1cm。

3.根据权利要求1所述的制作方法，其特征在于，所述70％乙醇与水的体积比为1：1。

4.根据权利要求1所述的制作方法，其特征在于，所述步骤二的具体步骤为：在LeicaCM1950冷冻切片机的冷台底座先加OCT冷冻包埋剂至满足短段样品大小，预冷冻15～20s，将底座取出，将所述短段样品垂直置于冷冻包埋剂中，并再加OCT冷冻包埋剂使样品完全包裹住，并放在Leica CM1950冷冻切片机中的样品台上，放置30～60分钟，箱体最低设置温度为-15℃。

5.根据权利要求4所述的制作方法，其特征在于，放置的时间为30～50分钟。

6.根据权利要求1所述的制作方法，其特征在于，步骤三中修片时切片的厚度设置为50～60μm。

7.根据权利要求1所述的制作方法，其特征在于，步骤三切片时箱体最低设置温度为-15℃，切片头最低设置温度为-20℃。

8.根据权利要求1所述的制作方法，其特征在于，步骤四的具体步骤为：将切下来的切片用毛笔小心取出，放置在水中将切片上沾有多余的OCT冷冻包埋剂溶解洗涤干净，再将切片平铺至载玻片上，滴加水合氯醛试液，加盖玻片；将切片立刻置于Nikon Ni-U正置偏光显微镜下观察拍照。