[发明专利]一种胃蛋白酶内毒素的去除方法

说明书

本发明提供一种胃蛋白酶内毒素的去除方法，属于胃蛋白酶技术领域。包括：1)溶解：取内毒素含量不合格的胃蛋白酶成品，溶于注射用水中，加入氯化钠，搅拌溶解后过滤澄清；2)超滤：过滤澄清得到的清液用超滤膜浓缩，再加入注射用水重复透析，直至无氯离子；3)除菌：采用滤膜除菌过滤；4)产品冷冻干燥后得到去除内毒素的胃蛋白酶产品。针对胃蛋白酶产品，与常见的内毒素去除方法相比，本发明采用的膜分离法能有效保护酶活，去内毒素效果更显著，可以使胃蛋白酶产品中内毒素含量达到行业标准。

技术领域

本发明属于胃蛋白酶技术领域，具体为一种胃蛋白酶内毒素的去除方法。

背景技术

胃蛋白酶是自猪胃粘膜中提取而得，是一种消化性蛋白酶，由胃部中的胃粘膜主细胞所分泌，功能是将食物中的蛋白质分解为小的肽片段，目前，药用胃蛋白酶一般是从猪胃粘膜中提取而得，用于消化不良。胃膜素是猪胃粘膜消化提取制得的粘蛋白，有抗胃蛋白酶分解和弱抗酸作用，能在胃内形成膜，覆盖溃疡面，减少胃酸的刺激，有利于溃疡面的愈合。

随着客户对胃蛋白酶产品的质量要求越来越高以及产品的应用越来越广泛，传统工艺生产的胃蛋白酶质量已不能满足客户的需求，传统工艺制备的产品含有大量的内毒素，内毒素会引起人体发热反应、白细胞减少以及内毒素休克，由于药品用途不断扩展及剂型的不断改进，客户对内毒素限量有了新的要求。常用内毒素去除的方法有活性炭吸附法、高温烘烤法、碱消毒法、柱层析法，但这些方法都存在一定缺陷，活性炭吸附法在吸附内毒素的同时会吸附大量的产品导致产品收率损失大；高温烘烤法只适合耐高温的产品，胃蛋白酶在高温下几乎完全失活；碱消毒法适合耐碱的产品，而胃蛋白酶在pH＞5时就会失活，不适合碱液处理；柱层析法能有效分离去除内毒素，但由于胃蛋白酶等电点为PH1.0，内毒素的等电点也偏酸性，大多在pH2-4，pH太接近，不适合用柱层析分离。

发明内容

本发明的目的在于提供一种胃蛋白酶内毒素的去除方法，通过本发明方法可以去除胃蛋白酶中的内毒素，提高胃蛋白酶的安全性及产品收率，扩展其应用领域。

本发明目的通过以下技术方案来实现:

一种胃蛋白酶内毒素的去除方法，包括以下步骤：

1)溶解：取内毒素含量不合格的胃蛋白酶成品，溶于注射用水中，加入氯化钠，搅拌溶解后过滤澄清；

内毒素含量大于2500EU/g为内毒素含量不合格的胃蛋白酶产品。溶于注射用水中不是其它如纯化水或自来水是因为注射用水几乎不含内毒素，若用其它类型的水会引入外源内毒素；加氯化钠的作用是为了后端超滤透析终点的控制，建立透析终点控制方法。

2)超滤：过滤澄清得到的清液用超滤膜浓缩，再加入注射用水重复透析，直至无氯离子；

超滤膜浓缩的作用是减小料液体积，从而减少后续加注射用水的量，提升透析的效率，缩短透析时间，避免操作时间过长，酶活损失。透析1次不能完全将胃蛋白酶从膜中洗涤流穿出来，还有大量产品残留在膜中，需重复透析才能将胃蛋白酶产品完全洗涤出来，从而提升产品的回收率。无氯离子的判断标准采用硝酸银检测氯离子残留，硝酸银与氯化钠反应生成白色的氯化银沉淀，当加入硝酸银溶液变浑浊，说明氯离子还有残留。

3)除菌：采用滤膜除菌过滤；

4)产品冷冻干燥后得到去除内毒素的胃蛋白酶产品。

进一步，步骤1)中，所述注射用水的温度为3-8℃，用量为胃蛋白酶质量的5～20倍。

进一步，步骤1)中，所述氯化钠的浓度为1％～10％，搅拌溶解时间为2-4h。

进一步，步骤1)中，所述过滤澄清采用0.8um及0.45um的滤膜过滤澄清。