[发明专利]一种基于过氧草酸酯类化学发光体系的生物标志物联合检测方法及试剂盒

说明书

本发明提供了一种基于过氧草酸酯类化学发光体系的生物标志物联合检测方法及试剂盒，该方法包括：将样品与含有标记不同荧光基团的特异性抗体溶液、包被特异性抗体的磁珠悬浊液混合充分发生“夹心”反应，然后利用磁场固定反复漂洗，去除未发生反应的抗体，再加入含有双草酸酯和含有过氧化氢的组份，充分反应，检测并记录反应溶液在不同波长下的发光强度数值，计算得到样品中生物标志物的浓度值。该方法利用多种荧光剂标记，在一个反应中能够产生多个波长信号，以达到同时检测多个生物标志物的目的，同时该方法具有灵敏度高、结果准确、操作简易、反应时间短的特点。

技术领域

本发明属于化学发光免疫分析生物标志物诊断技术领域，尤其涉及一种基于过氧草酸酯类化学发光体系的生物标志物联合检测方法及试剂盒。

背景技术

化学发光免疫分析既具备化学发光反应的高灵敏性，又具有免疫体系的高特异性。该技术因具有分析速度快、线性范围宽、无散射光干扰、无放射性污染、仪器设备简单等优势，在临床诊断、生命分析、环境科学等领域得到了广泛应用。

化学发光免疫分析技术主要用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术，是继放免分析、酶免分析、荧光免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起来的最为常用的免疫测定技术。

化学发光免疫分析包含两个部分，即免疫反应系统和化学发光分析系统。化学发光分析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化，形成一个激发态的中间体，当这种激发态中间体回到稳定的基态时，同时发射出光子，利用发光信号测量仪器测量光量子产额。免疫反应系统是将发光物质(在反应剂激发下生成激发态中间体)直接标记在抗原(化学发光免疫分析)或抗体(免疫化学发光分析)上，或酶作用于发光底物。

过氧草酸酯类化学发光系统是一类以草酸酯、过氧化氢和荧光剂以及一些增强发光效率的催化剂为主要组成的化学发光体系，属于以化学反应功能的化学发光分析方法。这种体系除了具有发光效率高、强度大、寿命长的特点外，还可以通过选择不同的荧光剂来调节发光的波长，获得不同的波长信号。

基于目前应用于临床检测的化学发光免疫分析检测产品反应原理，使用同样的发光标记物导致单个反应仅能检测一项指标，不能同时在单个反应中完成多项指标的检测。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种基于过氧草酸酯类化学发光体系的生物标志物联合检测方法及试剂盒，该方法利用多种荧光剂标记，在一个反应中能够产生多个波长信号，以达到同时检测多个生物标志物的目的，同时该方法具有灵敏度高、结果准确、操作简易、反应时间短的特点。

为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

本发明提供了一种基于过氧草酸酯类化学发光体系的生物标志物联合检测方法，包括如下步骤：

(1)将样品与组份1、组份2混合，充分反应；其中，所述组份1为含有标记不同荧光基团的特异性抗体溶液，所述组份2为包被特异性抗体的磁珠悬浊液；

(2)利用磁场固定反复漂洗，去除未发生反应的组份1；

(3)加入组份3和组份4，充分反应，检测并记录反应溶液在不同波长下的发光强度数值，计算得到样品中生物标志物的浓度值；其中，所述组份3为含有双草酸酯的溶液，所述组份4为含有过氧化氢的溶液。

优选的，所述样品为含有一种或多种生物标志物的样品，所述生物标志物包括蛋白质、核酸、小分子。

优选的，所述抗体为cTnI、NT-proBNP和D-dimer中的任意两种或三种所对应的特异性抗体。

优选的，所述抗体标记的不同荧光基团为FAM、Cy3和Cy5中的任意两种或三种。

优选的，所述荧光基团FAM、Cy3、Cy5的发射波长分别为520nm、563nm、662nm。