[发明专利]一种基于数字PCR技术检测ERBB2基因扩增的方法及其检测试剂盒

权利要求书

1.一种基于数字PCR技术检测ERBB2基因扩增的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括引物探针预混液，所述预混液中包括：检测ERBB2基因的上下游引物、检测ERBB2基因的荧光探针、检测人ATCB内参基因的上下游引物、检测人ATCB内参基因的荧光探针；

所述检测ERBB2基因的上下游引物、探针包括如下序列：

上游引物：5'-ACAACCAAGTGAGGCAGGTC-3'SEQ ID NO:1；

下游引物：5'-GTATTGTTCAGCGGGTCTCC-3'SEQ ID NO:2；

探针：5'-GGACATCCTTTGGCTTTTGA-3'SEQ ID NO:3；

所述检测ATCB内参基因的上下游引物、探针包括如下序列：

上游引物：5'-CGCCCTTTCTCACTGGTTC-3'SEQ ID NO:4；

下游引物：5'-TAGTACCTACACCCACAACAC-3'SEQ ID NO:5；

探针：5'-CTCTTCTGCCGTTTTCCGTAGG-3'SEQ ID NO:6。

2.根据权利要求1所述的一种基于数字PCR技术检测ERBB2基因扩增的试剂盒，其特征在于：所述检测ERBB2基因和ACTB内参基因的上游引物和下游引物的工作浓度为900nM。

3.根据权利要求1所述的一种基于数字PCR技术检测ERBB2基因扩增的试剂盒，其特征在于，所述检测ERBB2基因和ACTB内参基因的荧光探针的工作浓度为250nM。

4.根据权利要求1所述的一种基于数字PCR技术检测ERBB2基因扩增的试剂盒，其特征在于，所述ERBB2基因扩增区域的探针SEQ ID No.3和ATCB内参基因的探针SEQ ID NO.6均可独立地于5'端结合荧光基团，于3'端结合淬灭基团。

5.根据权利要求1所述的一种基于数字PCR技术检测ERBB2基因扩增的试剂盒，其特征在于，MET基因扩增区域的所述探针SEQ ID No.3和ATCB内参基因的所述探针SEQ ID NO.6的3'端均可独立地结合MGB修饰基团后再结合淬灭基团。

6.根据权利要求1所述的一种基于数字PCR技术检测ERBB2基因扩增的试剂盒，其特征在于，所述的ERBB2基因探针标记的荧光基团为FAM，淬灭基团为NFQ。

7.根据权利要求1所述的一种基于数字PCR技术检测ERBB2基因扩增的试剂盒，其特征在于，所述的ATCB内参基因探针标记的荧光基团为VIC；淬灭基团为NFQ。

8.一种基于数字PCR技术检测ERBB2基因扩增的方法，使用所述试剂盒进行PCR检测，其特征在于，包括以下步骤：

S1、提供被测者的检测样本，所述的检测样本为血浆样本；

S2、从S1中血浆样本中，提取待测样本的ctDNA；

S3、使用数字PCR平台对S2中提取样本进行扩增反应；

S4、对扩增结果进行分析与判读。

9.根据权利要求18所述的一种基于数字PCR技术检测ERBB2基因扩增的方法，其特征在于，所述步骤S2具体操作如下：本发明适用样本类型为患者全血样本，通过QIAampCirculating Nuleacid Kit试剂盒，提取cfDNA作为ddPCR检测的模板。

10.根据权利要求8所述的一种基于数字PCR技术检测ERBB2基因扩增的方法，其特征在于，所述S3中PCR对反应预混液进行如下扩增反应：95℃预变性10分钟；94℃变性30秒，57℃退火/延伸1分钟，共进行45个循环，10℃保持。