[发明专利]一种测定阿司帕坦中5-苄基-3,6-二氧-2-哌嗪乙酸含量的方法

说明书

本发明涉及一种测定阿司帕坦中5‑苄基‑3,6‑二氧‑2‑哌嗪乙酸含量的方法，所述的方法为高效液相色谱法，流动相：称取56g磷酸二氢钾，置容量瓶中，加820mL水溶解，用磷酸调节pH值至4.3，加甲醇稀释至刻度，摇匀；色谱系统：用46mm×25cm，填充担体L1的色谱柱；检测波长为210nm；流速为2mL/min；柱温40。该方法操作简便、专属性强、灵敏度高、重复性好。

技术领域

本发明涉及一种二肽类化合物，尤其涉及一种二肽类化合物的检测方法。

背景技术

阿司帕坦（Aspartame），N-L-α-天冬氨酰-L-苯丙氨酸-1-甲酯，俗称阿斯巴甜，化学式为C14H18N2O5，CAS号22839-47-0，结构式如下：。

阿司帕坦在室温下以白色粉末的状态存在，是一种天然功能性低聚糖，甜度高、不易潮解、不致龋齿，糖尿病患者可食用。阿司帕坦因其热量极低，又具有较高的甜度，可添加于饮料、药制品或无糖口香糖中作为糖替代品。

阿司帕坦作为强甜味剂广泛应用于口服药物制剂、饮料和食品，为无毒物质。但是，应该注意，阿司帕坦可能产生具有潜在毒性的代谢物甲醇，天冬氨酸和苯丙氨酸。其中，只有苯丙氨酸在阿司帕坦的正常摄取水平上产生的量较大，应加以关注。

现有技术研究表明，在合成阿司帕坦的过程中，不可避免会生成一些杂质，其中就包括5-苄基-3,6-二氧-2-哌嗪乙酸。5-苄基-3,6-二氧-2-哌嗪乙酸，分子式C13H14N2O4，CAS号5262-10-2，结构式如下：

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因为最终要施用到人体上，因此本领域对控制药物原料的质量控制有着非常严苛的要求，其中就包括控制药用辅料的质量。如前所述，阿司帕坦作为常用的药用辅料，检测其中杂质的含量对控制其质量有着重要的意义。现有技术中（如中国药典2020版四部）并没有披露具体的方法，因此，如何检测阿司帕坦中5-苄基-3,6-二氧-2-哌嗪乙酸的含量是一个亟待解决的技术难题。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种测定阿司帕坦中5-苄基-3,6-二氧-2-哌嗪乙酸含量的方法，该方法操作简便、专属性强、灵敏度高、重复性好，可以用来检测微晶纤维素-羧甲基纤维素钠的质量。

为了解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

所述的方法为高效液相色谱法。

优选的，所述的方法具体如下：

稀释液：水-甲醇溶液；

流动相：称取56g磷酸二氢钾，置容量瓶中，加820mL水溶解，用磷酸调节pH值至4.3，加甲醇稀释至刻度，摇匀；

标准品溶液：取5-苄基-3,6-二氧-2-哌嗪乙酸标准品，加稀释液溶解并定量稀释制成每1mL含70-80µg的溶液；

供试品溶液：取阿司帕坦50mg，精密称定，置10mL量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀；

色谱系统：用46mm×25cm，填充担体L1的色谱柱；检测波长为210nm；流速为2mL/min；柱温40；

测定法：取标准品溶液与供试品溶液各20μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图并测量主峰响应值，按下式计算阿司帕坦中5-苄基-3,6-二氧-2-哌嗪乙酸的百分含量：含量=(ru/rs)×(Cs/Cu)×100，式中Cs为标准品溶液中5-苄基3,6-二氧-2-哌嗪乙酸的浓度，单位为mg/mL；Cu为供试品溶液中阿司帕坦的浓度，单位为mg/mL；ru与rs为5-苄基-3,6-二氧-2-哌嗪乙酸在供试溶液与标准溶液中的峰面积。

优选的，所述稀释液中水与甲醇的体积比为9:1。

优选的，所述标准品溶液的浓度为75µg/mL。