[发明专利]一种检测GⅡ.4诺如病毒的电化学传感器

权利要求书

1.一种检测GⅡ.4诺如病毒的电化学传感器，其特征在于，包括以下步骤：

1)合成Fe₃O₄@COF(TpDA)，并表征：

(1.1)合成Fe₃O₄，用乙二醇70mL溶解六水合氯化铁1.35g、醋酸铵3.85g和柠檬酸钠0.4g；混合液在160℃下搅拌1h，形成均匀的黑色溶液，然后转移到不锈钢高压釜，容量100mL中，在200℃条件下反应16h，反应终止后自然冷却至室温；将产物用乙醇和水清洗，黑色产物在60℃真空环境下干燥；

(1.2)进一步合成Fe₃O₄@COF(TpDA)，取1，3，5-三甲酰间苯三酚TP，0.3mmol，63mg，2，6-二氨基蒽醌DA，0.43mmol，107mg和Fe₃O₄ 80mg，用3.0mL二氧杂环乙烷溶解；将混合物转移到玻璃反应管中，将反应管中液体悬浊液在液氮环境中冷冻抽真空，重复三次，除去反应体系中的氧气；将装有悬浊液的玻璃反应管置于温度为120℃油浴锅中，密封反应3天，反应结束后，自然冷却至室温；棕色产物用N，N-二甲基甲酰胺和四氢呋喃依次洗涤3次，冷冻干燥12h，得到Fe₃O₄@COF(TpDA)棕色粉末；

表征方法有：红外光谱，扫描电镜图像，透射电镜图像，EDS元素分析，Zeta电位，XRD粉末X射线衍射图谱，XPS光电子能谱；

2)合成并表征AuNPs@Fe₃O₄@COF(TpDA)纳米复合材料：

(2.1)合成AuNPs，将1.07mL浓度为23.46mmol/L的HAuCl₄溶液加入到100mL去离子水中，在110℃下加热搅拌5min，加入10ml浓度为14.53mmol/L的柠檬酸钠溶液，回流20-40min，直至溶液变为酒红色，自然冷却至室温，并于4℃下储存；

(2.2)Fe₃O₄@COF(TpDA)粉末分散在去离子水中，超声作用2h；然后，通过在离心获得Fe₃O₄@COF(TpDA)的悬浮液，用来去除较大的颗粒，离心后冷冻干燥12h，于4℃储存备用；

(2.3)将得到Fe₃O₄@COF(TpDA)的加水配制成浓度为1mg/mL的Fe₃O₄@COF(TpDA)溶液，取1mL Fe₃O₄@COF(TpDA)溶液滴加在10mL浓度为0.0002mol/L金纳米粒子溶液中，4℃搅拌12h，离心洗涤，得到Au@Fe₃O₄@COF(TpDA)纳米复合材料；

表征方法有：透射电镜图像，EDS元素分析，Zeta电位，XRD粉末X射线衍射图谱，XPS光电子能谱；

3)合成并表征WP5@AuNPs@Fe₃O₄@COF(TpDA)纳米复合材料：

配制0.5mg/mL的水溶性柱芳烃WP5溶液，将上一步得到的Au@Fe₃O₄@COF(TpDA)加水配置成1mg/mL的溶液，取1mL的WP5溶液滴加在2mL的AuNPs@Fe₃O₄@COF(TpDA)中，4℃搅拌4h，离心洗涤，得到WP5@AuNPs@Fe₃O₄@COF(TpDA)纳米复合材料；

表征方法有：红外光谱，Zeta电位；

4)合成APT@WP5@AuNPs@Fe₃O₄@COF(TpDA)纳米复合材料：

将30μL 10μmol/L的诺如病毒适配体APT加入到50μL 1mg/mL的WP5@AuNPs@Fe₃O₄@COF(TpDA)纳米复合材料溶液中，室温震荡12h，离心洗涤备用；

5)工作电极的制备方法：

将直径为3mm的玻碳电极用Al₂O₃抛光粉抛光成镜面，依次在50％硝酸溶液、50％无水乙醇、超纯水中超声清洗；在10mmol/L的HAuCl₄中用Amperometric i-t Curve进行富集，参数设置：初始电位0V，反应时间200s；

6)测定步骤：

(6.1)将直径为3mm的玻碳电极用Al₂O₃抛光粉抛光成镜面，依次在50％硝酸溶液、50％无水乙醇、超纯水中超声清洗；在10mmol/L的HAuCl₄中用Amperometric i-t Curve进行富集，参数设置：初始电位0V，反应时间200s，富集Au之后电极表面呈现出均匀的金色薄膜；

(6.2)配制1mg/mL的多肽NoroBP溶液，取10μL滴加在处理好的电极表面，4℃育温2h；

(6.3)用0.1mol/L pH 7.0PBS清洗电极3次，待电极干燥后，滴加10μL 1mmol/L的己硫醇HT，室温育温30min；

(6.4)用0.1mol/L pH 7.0PBS清洗电极3次，待电极干燥后，将10μL浓度为10^0.4-10^5.4copies/mL的一系列不同浓度的诺如病毒溶液滴加到步骤(2)处理过的玻碳电极表面，4℃育温30min；

(6.5)用0.1mol/L pH 7.0PBS清洗电极3次，待电极干燥后，将10μL浓度为1mg/mL的WP5@AuNPs@Fe₃O₄@COF(TpDA)纳米复合材料滴加在电极表面，室温育温45min；

(6.6)用0.1mol/L pH 7.0PBS清洗电极3次，待电极干燥后，滴加10μL 10mmol/L的亚甲基蓝MB溶液在电极表面，保持湿润，室温育温30min；

(6.7)用0.1mol/L pH 7.0PBS清洗电极3次，待电极干燥后，在10mL pH 7.0PBS溶液中用脉冲伏安法DPV对分析物进行检测，扫描电压范围-0.6-0V，脉冲振幅0.05V，脉冲宽度0.05s，绘制工作曲线；所述的分析物为水体样本或食品样本或呕吐物或粪便样本。