[发明专利]一种检测GⅡ.4诺如病毒的电化学传感器

说明书

本发明涉及GⅡ.4诺如病毒的检测材料、合成方法、检测方法；所述的材料包括Fe₃O₄@COF(TpDA)或AuNPs@Fe₃O₄@COF(TpDA)或WP5@AuNPs@Fe₃O₄@COF(TpDA)，三种材料依序合成；分析物为水体样本或食品样本或呕吐物或粪便样本；以及使用本发明方法制造的电化学免疫传感器。本发明制备得到的传感器的线性检测范围是2.51copies/mL‑10^5.4copies/mL，最低检测下限为0.84copy/mL。

技术领域

本发明属于电化学免疫传感领域，具体涉及了一种人诺如病毒检测的方法。

背景技术

人类诺如病毒(HuNOV)是引起世界范围内病毒性胃肠炎的主要原因。与全世界95％的非细菌性和50％的胃肠炎爆发有关。NoV共分为7个基因组群(GI-GVII)，每个基因型进一步划分为几个基因型。人类病原体只限于GI、GII和GIV的基因型，GII.4亚型在感染人的诺如病毒中是最常见的，占世界范围内诺沃克病毒感染病例的80％。

传统的检测方法有Real-time RT-PCR和ELISA，Real-time RT-PCR是通过提取病毒RNA，设计并合成引物和探针，用定量PCR仪进行荧光定量；ELISA即酶联免疫吸附测定法，此方法可以直接使用抗体捕获诺如病毒，并通过携带探针的抗体进行显色测定，Real-timeRT-PCR 法的特点是可以具有目的性的检测单一基因型的诺如病毒，对于多基因型的检测比较繁琐， ELISA法具有检测快速的特点，但是具有成本高，前期试剂准备复杂的缺陷。

公开号：CN111254217A，申请人：株式会社岛津制作所，申请名称：诺如病毒的检测方法的申请，其采用逆转录-聚合酶链式反应检测诺如病毒，检测的试剂盒包含二甲基亚砜(DMSO)。但二甲基亚砜(DMSO)含水时对铁、铜等金属有腐蚀性，且会因操作不当，而对眼睛、呼吸道和皮肤有强刺激作用。

公开号：CN111187861A，申请人：中国热带农业科学院热带生物技术研究所，申请名称：一种对海产品诺如病毒GII.4的检测方法的申请，将RT-LAMP反应产物加入到经Fe³⁺淬灭后的氧化钒量子点溶液中，分两次观察结果，以确认检测。但由于其涉及观察，可能存在人为主观因素差异影响。

发明内容

本发明正是为了解决上述问题缺陷，提供GⅡ.4诺如病毒的检测材料、合成方法、检测方法。

在本发明中，磁性复合共价有机框架纳米材料(WP5@AuNPs@Fe₃O₄@COF(TpDA))作为新一代符合纳米材料，具有良好的吸附性，能溶于水，可以结合抗体、适配体、多肽等具有识别作用的生物分子等特点。同时，WP5@AuNPs@Fe₃O₄@COF(TpDA)复合材料具有良好的导电性，并对信号分子亚甲基蓝(MB)具有优良的富集作用。

特异性识别诺如病毒多肽(NoroBP)是一种新型多肽，近年来在诺如病毒的检测方面已有相关报道。在这里，我们利用其可以组装在金电极并可以特异的识别GⅡ.4亚型诺如病毒的特点与磁性复合共价有机框架纳米材料共同作用构建了一个具有较高的灵敏度、较宽的检测范围、较快的检测速度、较低的检出限以及操作方便等优点的HuNOV电化学免疫传感器。

本发明的目的在于通过把多肽(NoroBP)组装在金电极上，构成一种可以捕获HuNOV GⅡ.4的电极表面，将病毒颗粒捕获并固定在电极表面。然后用已合成的负载了HuNOV GⅡ.4 适配体且具有优良电化学性能磁性复合共价有机框架纳米材料来识别电极表面的病毒颗粒，同时利用复合材料对亚甲基蓝优良的吸附能力将亚甲基蓝溶液滴加在电极表面进行孵育，最后在10mL浓度为0.1mol/L的pH为7.0-8.0的缓冲溶液中进行测试，构成一种可快速有效检测样品中诺如病毒的浓度的电化学传感器。