[发明专利]一种虎长效干扰素及其制备方法和在抗流感病毒中的应用

权利要求书

1.一种长效干扰素蛋白IFN-α+ALB，其特征在于，所述IFN-α+ALB的氨基酸序列如SEQID NO.1所示；所述IFN-α+ALB基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

2.如权利要求1所述长效干扰素蛋白IFN-α+ALB的制备方法，包括以下步骤：

步骤一、重组杆状病毒Bacmid质粒的构建：将IFN-α+ALB基因与pFastBac1载体的基因进行多克隆位点分析，选择载体上提供而目的片段中没有的两个限制性内切酶位点：EcoRI和NotI，双酶切后将回收目的片段插入到昆虫细胞表达载体 pFastBac1中，得到质粒pFastBac-IFN-α+ALB；然后，将质粒加入到DH10Bac感受态细胞中，经过冰浴，42℃热激，再次冰浴后，加入无抗性的LB培养基，37℃培养48h，挑取白斑菌落，加入LB培养基，37℃摇床培养12h，提取质粒DNA进行PCR 鉴定，鉴定正确的阳性质粒即为重组杆状病毒Bacmid质粒；

步骤二、重组杆状病毒的拯救：用重组杆状病毒Bacmid质粒转染昆虫细胞，拯救获得重组杆状病毒；

步骤三、蛋白的大量表达及纯化：将获得的重组杆状病毒按MOI=3感染昆虫细胞，3天后收获上清，将获得的上清通过镍柱亲和层析的方式纯化，即可得到长效干扰素蛋白IFN-α+ALB。

3.如权利要求2所述的长效干扰素蛋白IFN-α+ALB的制备方法，其特征在于，所述步骤二中当昆虫细胞的细胞汇合达到 80％以上时，进行转染。

4.如权利要求2所述的长效干扰素蛋白IFN-α+ALB的制备方法，其特征在于，所述步骤三中的纯化操作方法为将上清加入到镍柱中使其充分结合，然后用25mM的咪唑冲洗，再用250mM的咪唑洗脱。

5.如权利要求1所述的长效干扰素蛋白IFN-α+ALB在制备老虎抗流感病毒药物中的应用。