[发明专利]一种不依赖于纯化对PCR扩增产物直接进行Sanger测序的方法

权利要求书

1.DNA测序方法，包括：

1)利用5’端带有测序引物的引物对对待测DNA片段进行PCR扩增，得到扩增产物；

2)在含有测序引物与所述扩增产物的测序反应体系中进行测序反应，得到测序产物；所述测序引物的3’端带有不能被核酸外切酶进行切割的修饰；

3)分析所述测序产物，得到所述待测DNA片段的序列，完成测序。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤2)中，所述不能被核酸外切酶进行切割的修饰为对所述测序引物的3’端的核苷酸间的磷酸二酯键的修饰。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：对所述测序引物的3’端的核苷酸间的磷酸二酯键的修饰为对所述测序引物的3’端的n个核苷酸间的磷酸二酯键的修饰，n为大于等于2小于等于10的整数。

4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：步骤2)中，所述修饰为硫代修饰。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述测序引物为M13F和/或M13R，所述M13F由在序列表中序列1所示的单链DNA的3’端的三个核苷酸间的磷酸二酯键进行硫代修饰得到；所述M13R由在序列表中序列2所示的单链DNA的3’端的三个核苷酸间的磷酸二酯键进行硫代修饰得到。

6.根据权利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：步骤2)中，所述测序反应体系中含有核酸外切酶。

7.根据权利要求1-6中任一所述的方法，其特征在于：步骤2)中，所述测序反应首先将所述测序反应体系在37℃孵育。

8.根据权利要求1-7中任一所述的方法，其特征在于：步骤1)中，5’端带有测序引物的引物对为所述引物对中一条或两条引物带有测序引物。

9.下述任一产品：

X1、权利要求1-8中任一所述步骤2)中的所述测序引物；

X2、权利要求1-8中任一所述步骤2)中的所述测序反应体系中试剂；

X3、由权利要求1-8中任一所述步骤2)中的所述测序引物和所述测序反应体系中试剂组成的成套试剂。

10.权利要求9中所述产品在DNA测序中的应用，或在制备DNA测序产品中的应用。