[发明专利]一种用于Treg细胞高效扩增的可降解细胞膜及其制备方法、应用

权利要求书

1.一种用于扩增Treg细胞的细胞膜，其特征在于，所述细胞膜的表面表达IL-15和CD40L蛋白；

所述的细胞膜为人K562细胞；

所述IL-15与跨膜蛋白连接；连接物和跨膜蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示；

所述CD40L的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示。

2.权利要求1所述的细胞膜的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括：

（1）制备IL-15和CD40L蛋白的表达质粒；

（2）IL-15和CD40L蛋白的表达质粒转染细胞；

（3）收集并破碎转染成功的细胞，获得细胞膜碎片；所述的细胞膜为人K562细胞。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的转染通过电转实现。

4.权利要求1所述的细胞膜的应用，其特征在于，所述的细胞膜作为骨架或者基质，促进Treg细胞的体外生长。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的应用包括以下步骤：

S1，制备表达IL-15和CD40L蛋白的质粒；

S2，表达IL-15和CD40L蛋白的质粒转染细胞；所述的细胞膜为人K562细胞；

S3，收集并破碎转染成功的细胞，获得细胞膜碎片；

S4，将步骤S3获得的细胞膜碎片、IL-15和CD40L蛋白加入培养Treg细胞的介质或者容器；细胞膜与IL-15或者CD40L蛋白比例为1：2-2：1，摩尔比；

S5，在上述步骤S4的容器或者基质中加入Treg细胞，Treg细胞的接种密度为10⁴-5*10⁶个/ml。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，表达IL-15和CD40L蛋白的质粒通过下述方法制备：

获得编码IL-15和CD40L蛋白的核酸分子；

在IL-15序列和/或CD40L序列末端连接连接物；

将连接后的核酸分子构建入表达载体中；

编码IL-15、连接物、跨膜蛋白核酸分子的序列如SEQ ID NO：1所示,编码CD40L蛋白的核酸分子的序列如SEQ ID NO：3所示。