[发明专利]一种用于Treg细胞高效扩增的可降解细胞膜及其制备方法、应用

说明书

本发明属于生物医药领域，涉及一种Treg细胞快速扩增的新方法。本发明还包括一种用于Treg细胞高效扩增的可降解细胞膜及其制备方法。本发明提供了一种用于扩增Treg细胞的细胞膜，该细胞膜表面表达IL‑15和CD40L蛋白；所述的细胞膜源自具有多向分化潜能的造血系统的恶性肿瘤细胞，该恶性肿瘤细胞能自发分化为红系、粒系和单核系的可辨识的祖细胞。本发明中使用的膜材料无菌无毒，可以直接用于Treg细胞，乃至将培养获得的Treg细胞植入体内。本发明制备的细胞膜可降解，为后续处理提供了便捷，降低了污染的概率。本发明为在短时间内获得大量的Treg细胞提供了新的途径和方法。

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及一种Treg细胞（调节性T 细胞，T Regulatory 细胞)快速扩增的新方法。本发明还包括一种用于Treg细胞高效扩增的可降解细胞膜及其制备方法，和应用。

背景技术

调节性T细胞 (T Regulatory 细胞，Treg细胞)，是一类与机体免疫平衡相关的细胞亚群，它们可以主动抑制普通 T 细胞的功能，维持免疫系统对自身成分的耐受，使机体保持免疫稳态。Treg细胞主要分布于人体的胸腺、外周血、淋巴器官及脐静脉血中，以表达Foxp3、CD25、CD4 为细胞表型特征，在过去20 年内的研究已经证实了类风湿性关节炎(RA)、系统性红斑狼疮（SLE）、Ⅰ型糖尿病（T1D）等自身免疫疾病是由于自身的Treg细胞和效应T细胞（Teff）的失衡引起的。临床试验的数据表明，特别是由于 nTreg 细胞缺乏所致的器官特异性免疫病，可以通过重构Foxp3+nTreg 细胞而达到治疗效果。临床实验证明小剂量 IL-2 的输注可使 Treg 细胞增殖而不引起效应 T 细胞扩增，临床上为了预防 GvHD，通常通过体外扩增被供体者外周血单核细胞刺激过得 Treg 细胞，然后把这些 Treg 细胞和造血干细胞一同输入患者体内。

Treg按其来源可分为天然产生的自然调节性T细胞（nTreg）和诱导产生的适应性调节性T细胞(aTreg或iTreg)。其中自然调节性T细胞主要为CD4+CD127lo/−CD25+的Treg细胞,约占外周血及脾脏CD4+T细胞的5%～10%,除表达CD4分子和CD25分子外，其特征标志为其高表达转录因子Foxp3；适应性调节性T细胞包括Tr1，Th3等细胞，是在小剂量抗原或免疫抑制性细胞因子诱导下由外周幼稚T细胞发育而成的，主要分泌IL-10和TGF-β发挥免疫负调控作用。

在人体的外周血淋巴细胞中Treg占比1%至2%，由于Treg 细胞的数量较少，并且体外扩增Treg 细胞的效率一直很低，这对临床中使用Treg 细胞治疗就带来了极大的不便和困难，因此开发一种可以快速高效的扩增Treg细胞的方法对于推广该疗法用于临床非常重要。

发明内容

本发明目的在于：提供一种在体外快速扩增Treg细胞，为一种细胞膜。

本发明再一目的在于：提供上述细胞膜的制备方法。

本发明的又一目的在于：提供一种所述细胞膜的使用方法，通过上述实验材料和方法实现Treg细胞的体外快速扩增，并且扩增获得的细胞能够正常、健康的持续生长。。

本发明提供了一种Treg细胞快速扩增的方法，制备了一种细胞膜结构，可以表达在膜表面，营造了体内细胞扩增的三维环境，有利于Treg细胞的快速扩增。

一方面, 本发明提供了一种用于扩增Treg细胞的细胞膜，所述的细胞膜表面表达IL-15和CD40L蛋白。

所述的细胞膜源自具有多向分化潜能的造血系统的恶性肿瘤细胞，该恶性肿瘤细胞能自发分化为红系、粒系和单核系的可辨识的祖细胞。例如，在本发明的一个优选实施例中，所述的细胞膜源自人K562细胞。

所述的IL-15蛋白与跨膜蛋白连接，含有IL-15、连接物（linker）和跨膜蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO 2 所示。