[发明专利]用于检测人类白细胞抗原B位点1502基因的引物和探针组合及试剂盒

权利要求书

1.用于检测人类白细胞抗原B位点1502基因的引物和探针组合，其特征在于，包括扩增第5内含子的引物和探针以及扩增第2外显子的引物和探针；

所述扩增第5内含子的引物由SEQ ID NO：1所示正向引物和SEQ ID NO：2所示反向引物组成；所述扩增第5内含子的探针序列如SEQ ID NO：3所示；

所述扩增第2外显子的引物由SEQ ID NO：4所示正向引物和SEQ ID NO：5所示反向引物组成；所述扩增第2外显子的探针序列如SEQ ID NO：6所示。

2.根据权利要求1所述的引物和探针组合，其特征在于，所述引物和探针组合还包括内标引物和内标探针，所述内标引物由SEQ ID NO：7所示正向引物和SEQ ID NO：8所示反向引物组成；所述内标探针序列如SEQ ID NO：9所示。

3.根据权利要求1或2所述的引物和探针组合，其特征在于，所述引物和探针组合中的探针为Taqman探针，探针的核苷酸序列5’端标记荧光基团，3’端标记荧光淬灭基团。

4.根据权利要求3所述的引物和探针组合，其特征在于，所述荧光基团为FAM、ROX、CY5中的一种，扩增第5内含子的探针、扩增第2外显子的探针与内标探针5’端标记不同的荧光基团。

5.根据权利要求1或2所述的引物和探针组合，其特征在于，所述引物和探针组合中的探针为MGB探针。

6.用于检测人类白细胞抗原B位点1502基因的试剂盒，其特征在于，包括PCR反应液1和PCR反应液2；所述PCR反应液1包括权利要求1至5中任一项所述的引物和探针组合，以及PCR缓冲液、dNTPs、甘油、rTth酶、UDG酶、防腐剂和水；

所述PCR反应液2为醋酸锰水溶液。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述PCR反应液1中各组分浓度为：

所述PCR缓冲液为含有Tricine和醋酸钾的水溶液；所述Tricine的浓度为0.04～0.06M，pH值为8.0～9.0；所述醋酸钾的浓度为0.09～0.12M。

8.根据权利要求6或7所述的试剂盒，其特征在于，所述PCR反应液2中醋酸锰的浓度为7.5～22.5mmol/L。

9.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述检测人类白细胞抗原B位点1502基因的PCR反应体系为：

PCR反应液1 5～50μL

PCR反应液2 5～50μL

样本 10～100μL；

扩增程序为：50℃ 2min；95℃ 2min；95℃ 10s，60℃ 22s，45个循环；40℃ 10s。

10.根据权利要求6至9中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阴性质控和阳性质控。