[发明专利]用于检测人类白细胞抗原B位点1502基因的引物和探针组合及试剂盒

说明书

本发明涉及体外诊断技术领域，特别涉及用于检测人类白细胞抗原B位点1502基因的引物和探针组合及试剂盒。该引物和探针组合包括扩增第5内含子的引物和探针以及扩增第2外显子的引物和探针；扩增第5内含子的引物由SEQ ID NO：1所示正向引物和SEQ ID NO：2所示反向引物组成；扩增第5内含子的探针序列如SEQ ID NO：3所示；扩增第2外显子的引物由SEQ ID NO：4所示正向引物和SEQ ID NO：5所示反向引物组成；扩增第2外显子的探针序列如SEQ ID NO：6所示。本发明提供的实时荧光定量PCR的引物和探针灵敏度高、特异性强，可准确检出低至1ng/ul的基因组DNA。

技术领域

本发明涉及体外诊断技术领域，特别涉及用于检测人类白细胞抗原B位点1502基因的引物和探针组合及试剂盒。

背景技术

癫痫又称脑痫、羊角风，是一种由多种病因引起的慢性脑部疾病，以脑神经元过度放电导致反复性、发作性和短暂性的中枢神经系统功能失常为特征。抗癫痫药物治疗是癫痫治疗最重要和最基本的治疗，也往往是癫痫的首选治疗。癫痫在任何年龄、地区和种族的人群中都有发病，但以儿童和青少年发病率较高。近年来随着我国人口老龄化，脑血管病、痴呆和神经系统退行性疾病的发病率增加，老年人群中癫痫发病率已出现上升的趋势。国内流行病学资料显示，我国癫痫的患病率在4‰到7‰之间，每年近40万新发癫痫患者。癫痫患者的死亡危险性为一般人群的2-3倍，已成为神经科仅次于脑血管病的第二大常见疾病。WHO将癫痫列为重点防控的神经、精神疾病。

卡马西平(Carbamazeine)是临床精神科常用的一线抗癫痫药物。但其治疗窗窄，血药浓度个体差异大，易产生药物不良反应(Adverse Drug Reactions，ADRs)，包括严重的皮肤不良反应(Severe Cutaneous Adverse reactions，SCARs)，如史蒂文斯-约翰逊综合征(Stevens-Johnson Syndrome，SJS)/中毒性表皮坏死溶解症(Toxic EpidemnalNecrolysis，TEN)等。药物不良反应就是合格的药品在正常的用法用量下出现的与用药目的无关的意外的有害反应。其中罕见、严重的不良反应一般与用药人特异体质因素或某些代谢酶的遗传因素有关。

SJS又称重症多形红斑，特点是大面积表皮和黏膜上皮细胞的脱落，且口咽部、眼睛、生殖器和肛门等黏膜组织也都有典型表现；TEN则为更严重的类型，有研究认为它们是同一种疾病的两种不同严重程度。当皮肤剥离面积小于10％为SJS，大于30％为TEN，两者之间则为SJS/TEN重叠。SJS与TEN每年的发病率分别为1-6/10⁶和1-2/10⁶，但致死率很高，尤其TEN较为严重，致死率高达40％。虽然由芳香族抗癫痫药物诱发的严重皮肤不良反应发病率较低，但是因其严重威胁患者的生命，越来越引起足够的重视。有研究证实，卡马西平诱导的SJS/TEN与患者是否携带HLA-B*1502等位基因有很大关联。

HLA-B*1502是一种人类白细胞抗原HLA等位基因，几乎只存在于亚洲人种之中，包括中国汉族人、菲律宾人、马来西亚人、南亚印度人和泰国人。人类白细胞抗原(humanleucocyte antigen，HLA)是人类主要组织兼容性抗原(major histocomptibilityantigen，MHC)的别称，HLA基因位于6号染色体短臂上的21.31区(6p21.31)，是一群紧密连锁的复等位基因，包括200多个基因座位，共554个等位基因，全长4079kb，占人类整个基因组的1/3000，是最为复杂的调控人体特异性免疫应答和决定疾病易感性个体差异的主要基因系统，在不同的种族或同一种族不同群体中的分布显示明显的特异性。根据HLA基因表达产物的结构、表达方式、组织分布与功能不同，至少可将其分为3类，即HLA-I类、II类及III类基因。