[发明专利]一种测定牛膝中水龙骨素B含量的方法

权利要求书

1.一种测定牛膝中水龙骨素B含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：

A．对照品溶液的制备：取对照品水龙骨素B，加甲醇溶解，按浓度呈梯度分布配制至少五份对照品溶液；

B．供试品溶液的制备：取供试品牛膝，干燥粉碎后，向牛膝药材粉末中加入水饱和正丁醇，密塞，称定重量，浸泡，超声处理，放冷后以水饱和正丁醇补足重量，摇匀，离心；用甲醇洗涤离心管和残渣，合并上清液和洗液，减压浓缩至干，残渣加甲醇使溶解，转移至容量瓶中，加甲醇至刻度，取续滤液作为供试品溶液；

C．标准曲线的绘制：取所得对照品溶液，分别注入高效液相色谱仪中进行测定，记录对应的色谱图和峰面积；

以对照品溶液的浓度为横坐标X，峰面积为纵坐标Y，绘制标准曲线，计算得线性回归方程；

D．结果计算：取所得供试品溶液，注入高效液相色谱仪中进行测定，将所得峰面积带入所述标准曲线的线性回归方程中，即得供试品牛膝中水龙骨素B的含量；

高效液相色谱仪内色谱条件满足：

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，柱长为250mm，内径为4.6mm，粒度为5μm；

色谱柱柱温：20～40℃；

检测器：UV-PAD检测器；

流动相：以乙腈为流动相A，以0.1%甲酸水溶液为流动相B；

流动相流速：0.8～1.2mL/min；

进样量：2～20μL；

检测波长：250nm；

流动相按下表进行梯度洗脱，具体为：

。

2.根据权利要求1所述的测定牛膝中水龙骨素B含量的方法，其特征在于，在步骤A中，所述对照品溶液中，水龙骨素B含量为0.0580～1.066mg/mL。

3.根据权利要求1或2所述的测定牛膝中水龙骨素B含量的方法，其特征在于，在步骤A中，所述对照品溶液为五份，浓度分别为：0.0580mg/mL、0.1012mg/mL、0.2108mg/mL、0.5020mg/mL及1.066mg/mL。

4.根据权利要求1所述的测定牛膝中水龙骨素B含量的方法，其特征在于，在步骤B的水饱和正丁醇中，以水与正丁醇之间的体积比为1:1。

5.根据权利要求1或4所述的测定牛膝中水龙骨素B含量的方法，其特征在于，在步骤B的超声处理中，电磁波频率30～60 kHz，温度为15～30℃。

6.根据权利要求5所述的测定牛膝中水龙骨素B含量的方法，其特征在于，在步骤B中，所述离心速率为2000r/min。

7.根据权利要求1或6所述的测定牛膝中水龙骨素B含量的方法，其特征在于，在步骤B的减压浓缩中，温度60～80℃。

8.根据权利要求1所述的测定牛膝中水龙骨素B含量的方法，其特征在于，在步骤B中，取供试品牛膝，干燥粉碎后，称牛膝药材粉末1～5g，加入水饱和正丁醇10～40mL，密塞，称定重量，浸泡过夜，超声处理，放冷后以水饱和正丁醇补足重量，摇匀，离心，用甲醇10～20mL分3～5次洗涤离心管和残渣，合并上清液和洗液，减压浓缩至干，残渣加甲醇使溶解，转移至5～10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，取续滤液作为供试品溶液。

9.根据权利要求1所述的测定牛膝中水龙骨素B含量的方法，其特征在于，在步骤B中，所述方法的检测限可达到0.75μg/mL。