[发明专利]一种测定牛膝中水龙骨素B含量的方法

说明书

本发明提供了一种测定牛膝中水龙骨素B含量的方法，属于中药有效成分的分析检测技术领域。所述检测方法通过分别制备供试品溶液、对照品溶液，然后取对照品溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪，以乙腈‑0.1%甲酸水溶液为流动相，进行脱洗。本方法操作简便、稳定性高、重复性好、专属性强，并具有供试品制备简单、设备要求较低、实验操作安全、稳定性高、重复性好、专属性强以及操作简便等优势，为后续牛膝中水龙骨素B的定性、定量的研究等提供产品质量控制、评价指标提供可靠的检测方法。

技术领域

本发明涉及一种中药材中有效成分含量的测定方法，尤其涉及一种测定牛膝中水龙骨素B含量的方法，属于中药有效成分的分析检测技术领域。

背景技术

牛膝为觅科植物牛膝的干燥根，冬季茎叶枯萎时采挖，除去须根和泥沙，捆成小把，晒至干皱后，将顶端切齐，晒干。用于逐瘀通经，补肝肾，强筋骨，利尿通淋，引血下行。用于经闭，痛经，腰膝酸痛，筋骨无力，淋证，水肿，头痛，眩晕，牙痛，口疮，吐血，鲍血。

文献“β-蜕皮激素和水龙骨素B的混合物对促进对虾蜕皮的生长作用，罗日祥等，1990”中提到：试验β-蜕皮激素和水龙骨素B（2:1）的混合物促进对虾蜕皮生长的作用。其中，牛膝中有效处成分水龙骨素B属于蜕皮甾酮类化合物。文献“怀牛膝对记忆力和耐力的影响，马爱莲等，2013”文献中提到：蜕皮甾酮具有促进学习记忆和改善脑功能障碍的药理活性。文献“蜕皮甾酮对撞击致肺挫伤的影响，吴旭等，2016”中提到：牛膝中的蜕皮甾酮对撞击所致挫伤有一定治疗作用。另，文献“蜕皮甾酮软膏对家兔创面愈合的影响，李钰珑等，2008”中可知：蜕皮甾酮软膏有明显促进伤口愈合的作用，与云南白药作用相当。由此可见，蜕皮甾酮类化合物有着良好的药理作用，而水龙骨素B属于蜕皮甾酮类化合物，也有着蜕皮甾酮类化合物的性质，因此，对水龙骨素B的研究同样意义重大。

2020版《中国药典》中牛膝和川牛膝的鉴定和含量测定均未涉及水龙骨素B，且目前未有论文、专利等文献公开过牛膝中的水龙骨素B的分析检测、分离纯化制备等。文献“牛膝不同炮制品中化学成分的UPLC-Q-TOF-MS分析，陶益等，2017”中仅公开：比较生牛膝、酒牛膝及盐牛膝的各项质控指标及化学成分的差异，结果表明：生牛膝、酒牛膝及盐牛膝的水分、总灰分及醇溶性浸出物的含量均符合2015年版《中国药典》的要求，运用高分辨质谱鉴定了10个主要化学成分，分别为苄基葡萄糖苷、苄基葡萄糖苷异构体、牛膝甾酮A、水龙骨素B、β-蜕皮甾酮、牛膝甾酮、姜状三七苷R1、人参皂苷Ro、牛膝皂苷Ⅰ和竹节参皂苷Ⅳ。牛膝经酒炙后苄基葡萄糖苷、苄基葡萄糖苷异构体、水龙骨素B、β-蜕皮甾酮和人参皂苷Ro的含量显著升高，而姜状三七苷R1、牛膝皂苷Ⅰ和竹节参皂苷Ⅳ的含量则显著减低；盐炙后苄基葡萄糖苷、苄基葡萄糖苷异构体、牛膝甾酮A、水龙骨素B、β-蜕皮甾酮和牛膝甾酮含量显著升高，而姜状三七苷R1、人参皂苷Ro、牛膝皂苷Ⅰ和竹节参皂苷Ⅳ的含量则显著降低。同时得出：牛膝炮制后酚苷类和甾体皂苷类成分的含量显著上升，而三萜皂苷类成分的含量则显著降低。

以及，文献“牛膝不同炮制品中化学成分的UPLC-Q-TOF/MS检测分析，胡清宇，2018”中仅公开：分析应用UPLC-Q-TOF/MS对牛膝不同炮制品中化学成分的临床检测价值，结果表明：UPLC-Q-TOF/MS对牛膝不同炮制品中化学成分的临床检测价值在生牛膝、酒牛膝和盐牛膝3种炮制品中差异无统计学意义（P0.05），但酒牛膝的检验灵敏度和特异性较高，差异具有统计学意义（P0.05）。同时得出：牛膝含有三萜皂甙、多种多糖、肽类和氨酸类等多种化学成分，应用UPLC-Q-TOF/MS对牛膝不同炮制品中化学成分的临床检测价值确切，对酒牛膝的灵敏性和特异性较高，值得临床检测其有效成分，以指导临床用药，提供理论和临床实践依据。

发明内容