[发明专利]一种吡咯并喹啉醌二钠盐的纯化方法

说明书

本发明公开了一种吡咯并喹啉醌二钠盐的纯化方法，首先将吡咯并喹啉醌二钠盐溶解在含有表面活性剂的缓冲盐溶液中，使用以反相聚合物微球为填料的色谱柱进行色谱分离；得到纯化后的吡咯并喹啉醌盐溶液，再经过浓缩、结晶、干燥的过程得到吡咯并喹啉醌二钠盐。本纯化方法纯化得到的吡咯并喹啉醌二钠盐纯度高，单杂≤0.1％，收率高；纯化用的树脂吸附量大，寿命长，可以重复利用，适用于规模化生产。

技术领域

本发明属于药物纯化领域，具体地，本发明涉及涉及一种高纯度吡咯并喹啉醌二钠盐的纯化方法。

背景技术

吡咯并喹啉醌(PQQ)二钠盐(以下简单称为：“PQQ”)，化学名：4,5-二氧代-4,5-二氢-1H-吡咯并[2，3-F]喹啉-2,3,9-三羧酸二钠盐。是一种新型水溶性维生素，是一种氧化还原酶辅基，对微生物和动植物均具有重要的生理作用：可以提高人体的免疫力，减少自由基对人体的伤害，调理各种神经系统疾病，促进氨基酸的吸收，促进合成生长因子，防止老年痴呆症，促进合成谷胱甘肽等。其结构如下图所示：

目前主要通过发酵方法和化学合成方法来取得吡咯并喹啉醌(PQQ)二钠盐，本纯化方法主要针对：化学合成法或者发酵法生产的，经过离心、萃取、沉淀、结晶等过程后含量为90-97％的吡咯并喹啉醌盐。

由于PQQ结构的复杂性，普通的有机溶剂体系很难将其与杂质分离，专利和文献中报道PQQ纯化很少。专利CN201510843823.5报道了一种吡咯并喹啉醌PQQ二钠盐杂质的纯化方法，用5微米的GP C18填料，柱压约12MPa，样品纯度＞95％，载量小于0.2％。这个专利的纯化过程存在柱层析载量低、柱压高造成生产成本高的问题。并且FDA要求单杂不超过0.1％。因此，提供一种载量高、自动化水平高、生产成本低的高纯度吡咯并喹啉醌PQQ二钠盐纯化方法，是非常有必要的。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明提供了一种高纯度吡咯并喹啉醌PQQ二钠盐的纯化方法，用反相层析纯化即可得到符合FDA要求的吡咯并喹啉醌PQQ二钠盐。

本发明所提供的高纯度吡咯并喹啉醌二钠盐的纯化方法，主要是反相层析进行分离纯化，然后经过浓缩、结晶、干燥得到高纯度吡咯并喹啉醌二钠盐。

具体地，反相层析以聚合物反相填料作为色谱柱的固定相，包含以下步骤：

(A)配制流动相A、B、C：

流动相A：含有0.1-2.0％(W/V)表面活性剂的缓冲盐溶液，缓冲溶液pH3-6；

流动相B：含有10-50％(V/V)有机溶剂-流动相A溶液，

流动相C：含有50-100％(V/V)有机溶剂-水溶液；

(B)溶解PQQ二钠盐：用流动相A溶解吡咯并喹啉醌(PQQ)二钠盐，加酸调节至pH3-6，溶解后PQQ的浓度为0.5-5mg/ml；

(C)装填色谱柱：聚合物反相填料用0-60％(V/V)的醇-水溶液湿法装柱，装柱压力0.5-20MPa，装柱高度大于25cm。

(D)柱平衡：用流动相A对色谱柱进行平衡4-6CV对色谱柱进行平衡，平衡过程线流速不高于10cm/min。

(E)上样：将吡咯并喹啉醌粗品溶解于平衡液中，用酸调节至pH 3.0-6.0，溶解后浓度为0.5-5mg/mL，上样至色谱柱，载量20-80g/L，过程线流速不高于10cm/min；上样过程出现目标物流穿后开始收集；

(F)洗脱：使用4-10CV的流动相B对吸附在色谱柱上吡咯并喹啉醌进行洗脱，洗脱过程线流速不高于10cm/min，合并收集洗脱液，为纯化后吡咯并喹啉醌盐溶液；