[发明专利]用于银龙鱼性别鉴定的SNP分子标记及其应用

说明书

本发明公开了一种用于银龙鱼性别鉴定的SNP分子标记及其应用，碱基序列为：SEQ IDNO.1；所述SNP分子标记为SEQ ID NO.1中第243位。通过基因组高通量测序对比以获取银龙鱼雌雄个体之间存在差异且能表征雌雄性别的单核苷酸多态性位点(SNP)，并结合引物扩增以获得包含SNP位点的扩增序列，在此基础上，通过引物实现待测样本的PCR扩增和测序，获得样本SNP位点信息，从而鉴别待测样本的性别。利用本发明的SNP位点，能在不剖解银龙鱼的前提下实现准确、快速的性别鉴定，且当该SNP位点应用于银龙鱼养殖时，便于实现成熟的人工养殖银龙鱼技术，以实现大量生产。

技术领域

本发明涉及鱼类性别鉴定技术领域，更具体地，涉及一种用于银龙鱼性别鉴定的SNP分子标记及其应用。

背景技术

银龙鱼又称双须骨舌鱼，是一种古老的“活化石”鱼类，作为名贵的观赏鱼具有十分重要的经济价值。目前，国内绝大多数的银龙鱼都是依赖进口，银龙鱼难以实现本土的大量养殖；因为目前银龙鱼繁殖技术受限，难以实现人工大量养殖。而限制繁殖技术的主要原因就体现于银龙鱼雌雄性别区分上的困难。

银龙鱼不具有两性特异性特征，在外部形态上不能区分，即使是在生殖季节，雌雄性鱼的特征也不明显。而且由于银龙鱼具有坚硬厚实的鳞片，通过B超，CT等手段也无法穿透鳞片而判定性别。目前，只能通过解剖观测性腺进行鉴定，无法实现简单、准确而又不需解剖即能鉴定的方法。正是由于没有准确判定性别的手段，才对该鱼的人工繁殖造成了很大的困扰；因为性别难以区分，大多数养殖场只能采用半自然的方法进行繁殖，而不能采用较高效可控的人工繁殖方式，例如雌雄鱼分塘暂养，注射催情剂和催产剂等，大大限制了繁殖效率和成功率。为了打破我国银龙鱼全部依赖进口的局面，银龙鱼的人工繁殖就成了急需解决的问题。

所以，亟需一种有效的银龙鱼性别鉴定方法或标记以区分银龙鱼雌雄性别，从而克服上述问题。

发明内容

本发明旨在克服上述现有技术的至少一种不足，提供用于银龙鱼性别鉴定的SNP分子标记及其应用，通过本发明的SNP位点能够在不剖解银龙鱼的前提下实现准确、快速的性别鉴定，从而不影响银龙鱼的正常生长、繁殖，当该SNP位点应用于银龙鱼的养殖时，便于提供性别鉴定而促进养殖技术的成熟和发展，提高繁殖率和成功率。

本发明提供了一种用于银龙鱼性别鉴定的SNP分子标记，碱基序列为：SEQ IDNO.1，长度为340bp；所述SNP分子标记为SEQ ID NO.1中第243位。

当第243位碱基为C/C纯合时，样品为雄性，为C/T杂合时，样品为雌性。SEQ IDNO.1仅为展示上述变化之一的代表性序列，对应其他包含上述变化的序列也应被保护。

本发明还提供一种用于鉴定或辅助鉴定银龙鱼性别的引物对，包括上游引物F和下游引物R，所述上游引物F的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述下游引物R的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

本发明还提供一种用于鉴定或辅助鉴定银龙鱼性别的试剂盒，含有上述的引物对、dNTP以及DNA聚合酶。

本发明还提供一种银龙鱼性别鉴定方法，包括以下步骤：

(1)提取待测银龙鱼的基因组DNA；

(2)以待测银龙鱼的基因组DNA为模板，利用前述上游引物F和下游引物R，进行PCR扩增反应；

(3)反应完成后进行分析，确定样品基因型，鉴定性别。

该方法能在不剖解的前提下实现银龙鱼的鉴别，且借助于包括本发明的多种测序方法或测序平台能够实现批量的测序，在此基础上，更有利于应用至银龙鱼的养殖、研究上，从而快速区分银龙鱼的性别，提高鉴别、养殖效率。该鉴定方法不仅快速、简单，且在本发明的一个以上实施例中也有所表明，鉴定结果准确。