[发明专利]一种磁珠法核酸提取液及其制备方法

说明书

本发明公开了一种磁珠法核酸提取液及其制备方法。该提取液包括改性的壳聚糖包覆的磁珠、结合液、洗涤液和洗脱液。本发明的提取液中包括改性的壳聚糖包覆的磁珠。通过对包裹磁珠的壳聚糖进行改性，得到的经过聚合氯化铝改性的壳聚糖包覆的磁珠可以显著提高对人全血基因组DNA的提取得率和纯度。

技术领域

本发明属于分析化学技术领域，具体涉及一种磁珠法核酸提取液及其制备方法。

背景技术

传统的核酸提取中，操作步骤多，分离时间长，分离效率低。

磁珠法提取核酸中，磁珠吸附核酸后，可以在磁场的作用下快速的分离，大大加快了提取的步骤。在此过程中提取液，特别是其中的磁珠，是核酸提取的过程中的关键因素。

对磁性的四氧化三铁的包覆材料的选择和改性的研究是制备磁珠的研究热点。

发明内容

本发明对四氧化三铁的包覆材料壳聚糖及其改性进行了研究，提出了一种包括改性的壳聚糖包覆的磁珠的核酸提取液。

本发明的第一方面在于公开了一种磁珠法核酸提取液，包括改性的壳聚糖包覆的磁珠、结合液、洗涤液和洗脱液；所述改性的壳聚糖包覆的磁珠为经过聚合氯化铝改性的壳聚糖包覆的磁珠。

本发明中提取液包括四个独立的组分，磁珠、结合液、洗涤液和洗脱液。

在本发明的一些实施方式中，制备所述经过聚合氯化铝改性的壳聚糖的材料包括以下重量份的各组分：

壳聚糖8-10份、乙酸8-10份、聚合氯化铝8-10份、氯化钙1-3份、水800-1000份。

在本发明的一些实施方式中，所述结合液为氯化钠和PEG6000的水溶液；

优选地，所述结合液中氯化钠的浓度为1.5-2.5M，PEG6000的浓度为8-12wt％。

在本发明的一些实施方式中，所述洗涤液为乙醇水溶液，优选为60-65v/v％的乙醇水溶液。

在本发明的一些实施方式中，所述洗脱液为TE缓冲液，其中，Tris-HCl的浓度为10-15mM，EDTA的浓度为1mM，pH为8.0-8.5。

本发明的第二方面在于公开了第一方面所述的提取液的制备方法，包括以下步骤：

S1，制备经过聚合氯化铝改性的壳聚糖；

S2，制备经过聚合氯化铝改性的壳聚糖包覆的磁珠。

在本发明的一些实施方式中，S1步骤中，包括以下步骤：

S11，混合水和氯化钙，搅拌；

S12，加入混合好的壳聚糖和乙酸，搅拌；

S13，加入聚合氯化铝，混合，搅拌，室温吸附2-3h；

S14，喷雾干燥，得到固体粉末。

在本发明的一些实施方式中，S2步骤中，包括以下步骤：

S21，四氧化三铁颗粒和水混合，超声，得到混合液A；

S22，经过聚合氯化铝改性的壳聚糖、乙二醛和乙酸水溶液混合，搅拌，得到混合液B；

S23，混合液A和混合液B混合，室温下搅拌6-8h；

S24，干燥；

其中，S21和S23在体系中通入氮气，S24在氮气气氛下进行干燥。

在本发明的一些实施方式中，S12步骤中，制备所述经过聚合氯化铝改性的壳聚糖的材料中，氯化钙的含量C通过以下公式确定：