[发明专利]一种金花茶CnFLS+反义F3’H双基因载体构建促进植物黄酮醇合成的方法

说明书

一种金花茶CnFLS+反义F3’H双基因载体构建促进植物黄酮醇合成的方法，属于基因工程技术领域。该方法包括：1）克隆金花茶CnFLS基因，合成烟草反义表达F3’H基因的干扰序列；2）构建CnFLS+反义F3’H双基因载体；3）将CnFLS+反义F3’H双基因载体转入大肠杆菌，测序正确后提取质粒转入农杆菌中，采用农杆菌介导的叶盘法转化本氏烟草；4）采用PCR鉴定转基因烟草阳性株系，测定阳性株系中黄酮醇、多酚的含量。本发明过表达金花茶的CnFLS基因，同时设计干扰F3’H基因的表达，CnFLS基因过表达促进合成黄酮醇，反义干扰F3’H基因的表达可抑制多酚、花青苷的合成，进而能使植物的花色变黄。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种金花茶CnFLS+反义F3’H双基因载体构建促进植物黄酮醇合成的方法。

背景技术

类黄酮广泛存在于多数植物体内，是大部分植物花色形成的决定性色素群，同时可提高植物的抗逆性等，还是一种天然有机抗氧化剂，具有较高的营养和保健价值。类黄酮是一大类次级代谢产物的统称，主要存在于花瓣表皮组织细胞的液泡中，其中黄酮（flavone）、黄酮醇（flavonol）等属黄色系，花青素（anthocyanin）属红色系，多酚（polyphenols）为无色系。

金花茶（Camellia nitidissima）花色金黄，不仅具有极高的观赏价值，还是黄花茶花育种的珍稀遗传资源。前人通过研究发现，金花茶花色形成的主要原因是花瓣中黄酮醇的含量较高导致的，而FLS基因（黄酮醇合酶基因）是黄酮醇合成的关键基因，但是前人仅是通过单独过表达金花茶CnFLS基因，很难使模式植物的黄酮醇的含量显著升高，进行形成金黄色的花朵。FLS基因与F3’H基因存在底物竞争作用，多项研究中发现FLS基因表达量升高，F3’H基因的表达量降低，更利于黄酮醇的合成，从而形成黄色花。

发明内容

针对上述现有技术中存在的缺陷，本发明的目的在于设计提供一种金花茶CnFLS+反义F3’H双基因载体构建促进植物黄酮醇合成的方法。本发明利用PCR扩增得到金花茶的CnFLS、人工合成烟草F3’H基因反义序列，使用OSCR克隆技术，进行酶切构建过表达CnFLS+反义表达F3’H的双基因表达载体，将得到的双基因表达载体转化本氏烟草，使阳性株系的黄酮醇含量得到显著提高。

一种金花茶CnFLS+反义F3’H双基因载体构建促进植物黄酮醇合成的方法，其特征在于包括以下步骤：

1）克隆金花茶CnFLS基因，合成烟草反义表达F3’H基因的干扰序列；

2）构建CnFLS+反义F3’H双基因载体；