[发明专利]一种酶催化合成琥珀酸氯霉素的工艺方法

说明书

本发明涉及一种酶催化合成琥珀酸氯霉素的工艺方法，属于生物医药技术领域，所述工艺方法以氯霉素为原料，使氯霉素与琥珀酸酐在水解酶的作用下，在溶剂中适宜条件下发生反应，完全转化后经简单过滤、脱色、重结晶即得高纯度琥珀酸氯霉素。所述的水解酶为蛋白酶、脂肪酶、脂肪酶、酰基转移酶中的任一种或多种组合，其中酶可以是天然来源或通过基因工程技术重组获得。本发明采用的酶催化工艺与已有的工艺相比，更方便、安全，污染更小，质量更高，成本更低，更适合琥珀酸氯霉素的大规模工业化生产。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体地，涉及一种琥珀酸氯霉素的合成方法。

背景技术

氯霉素(Chloramphenicol)是一种从委内瑞拉链霉菌中发现的酰胺醇类广谱抗生素。对革兰阳性及阴性菌、厌氧菌、螺旋体、衣原体和立克次体属均有抑制作用。临床上主要用于治疗伤寒、流感、肺炎、脑膜炎等，对百日咳、砂眼、细菌性痢疾及尿道感染等也有效。氯霉素类抗生素因其用途大且价廉易规模化合成制备，现在仍然是一线临床用药。

但氯霉素有抑制骨髓造血功能的严重不良反应，可使人体各类血细胞减少，甚至产生不可逆的再生障碍性贫血，因而限制了其扩大使用。因此，人们对氯霉素的结构进行改造，以期保持药效的同时降低毒副作用，其中琥珀酸氯霉素就是较成功的氯霉素衍生物。

琥珀酸氯霉素(Chloramphenicol Succinate)系统名为D-苏式-(-)-N-α-(羟基甲基)-β-羟基-对硝基苯乙基-2,2-二氯乙酰胺-α-琥珀酸酯，在体内能快速水解游离出氯霉素而产生作用，药效与氯霉素相同甚至更优，而副作用较氯霉素大大降低。其经典制备方法是由氯霉素和琥珀酸酐在有机碱催化下反应制得，在专利和论文等文献中相关化学合成方法报道较多，但传统化学合成方法原料用量多，产量较低，而且反应过程能耗高，反应试剂毒性大，污染环境，所用传统化学催化剂活性较低，导致反应选择性较差副产物较多，不仅产率不高而且产品质量较低，后处理精制困难。这些缺点限制了该方法的工业化应用。

综上，亟需开发一种成本更加低廉、操作更加方便、更加安全高效的琥珀酸氯霉素制备方法。

发明内容

针对上述问题，本发明的目的在于提供一种酶催化合成琥珀酸氯霉素的工艺方法，采用水解酶催化氯霉素与琥珀酸酐进行酯化反应生成琥珀酸氯霉素，生产效率和产品质量更高，具备操作方便、成本低廉、环境友好、安全高效等优点。

为了实现上述目的，本发明采用的具体方案为：

一种酶催化合成琥珀酸氯霉素的工艺方法，包括以下步骤：

步骤一、氯霉素和琥珀酸酐在生物酶催化下反应生成琥珀酸氯霉素：

将氯霉素和琥珀酸酐混溶入溶剂中，再加入水解酶，水浴控温0-60℃进行混合反应，监测至氯霉素转化完毕，则停止反应；回收酶催化剂，反应溶液加活性碳脱色，抽滤，滤液减压蒸馏除去溶剂，得白色固体产物；

所述琥珀酸酐和氯霉素的摩尔比为1-1.2：1；所述水解酶为蛋白酶、脂肪酶和酰基转移酶中的一种或多种，所述水解酶的加入量为氯霉素质量的5％-50％；

步骤二、精制：

向步骤一所得白色固体产物中加入良溶剂，室温搅拌至溶解，然后缓慢加入不良溶剂；或，向步骤一所得白色固体产物中加入由良溶剂和不良溶剂组成的结晶溶剂；缓慢降温至0～5℃，恒温静置，析出白色针状晶体，过滤，所得晶体50℃真空干燥2小时得精制产品；

所述良溶剂为甲醇、乙醇或丙酮中的任一种或多种混合溶剂；所述不良溶剂为水；所述良溶剂与不良溶剂的体积比为1:1，所述良溶剂和不良溶剂的总加入量为所述白色固体产物质量的8-12倍。

步骤一中，所述溶剂为丙酮、乙腈、四氢呋喃、甲基叔丁基醚、二氧六环、甲苯、异丙醚中任意一种或多种的混合物，优选丙酮。