[发明专利]检测紫外照射后微生物基因组损伤的方法

权利要求书

1.一种检测紫外照射后微生物基因组损伤的方法，其特征在于，包括以下步骤：

获取培养后的微生物，取部分微生物进行不同时长的紫外照射，照射后作为检测样本，未进行紫外照射的另一部分微生物作为对照样本；

裂解所述检测样本和所述对照样本；

分别对裂解后的所述检测样本和所述对照样本离心处理，获得上清，作为荧光定量PCR的模板；

取等量作为模板的上清加入两个PCR反应体系中，一个扩增短片段，另一个扩增长片段；

得到所述对照样本的CT差值为：ΔCT_CK＝CT_长-CT_短，所述检测样本的CT差值为：ΔCT_uv＝CT_长-CT_短，采用ΔΔCT＝ΔCT_uv-ΔCT_CK判断紫外对DNA的损伤。

2.根据权利要求1所述的检测紫外照射后微生物基因组损伤的方法，其特征在于，获得检测方法的检测限为所述对照样本标准偏差的3倍；

所述对照样本标准偏差为按照裂解，离心获得上清，以及将上清加入两个PCR反应体系中扩增短片段和长片段的步骤对所述对照样本进行20次相同的荧光定量PCR反应后得到。

3.根据权利要求2所述的检测紫外照射后微生物基因组损伤的方法，其特征在于，采用裂解液A裂解所述检测样本和所述对照样本，裂解时间为2分钟；

所述裂解液A的组成包括：

PH＝8.0的Tris-HCL 10mM

Triton X-100 1％。

4.根据权利要求3所述的检测紫外照射后微生物基因组损伤的方法，其特征在于，所述离心处理的离心速度为6000rpm，离心时间为2min。

5.根据权利要求4所述的检测紫外照射后微生物基因组损伤的方法，其特征在于，所述PCR反应体系中具有：PCR反应液B、PCR反应液C和酶液D；

所述PCR反应液B的组成包括：

溶剂为灭菌水；

所述PCR反应液C的组成包括：

溶剂为灭菌水；

所述酶液D的成分为DNA聚合酶。

6.根据权利要求5所述的检测紫外照射后微生物基因组损伤的方法，其特征在于，所述PCR反应体系中的PCR反应液B或者PCR反应液C的体积为17.7ul，酶液D的体积为0.3ul，上清的体积为2ul。

7.根据权利要求6所述的检测紫外照射后微生物基因组损伤的方法，其特征在于，所述PCR反应体系中的荧光定量PCR反应程序为：

第2-4步循环35次。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的检测紫外照射后微生物基因组损伤的方法，其特征在于，还包括将作为模板的阳性对照E和阴性对照F加入两个PCR反应体系中；

所述阳性对照E的成分为基因组DNA；

所述阴性对照F为所述裂解液A。