[发明专利]一种用于单细胞分析的多指标混合型流式抗体冻干微芯试剂盒

权利要求书

1.一种用于单细胞分析的多指标混合型流式抗体冻干微芯试剂盒，其特征在于，所述试剂盒内容物为存放于密闭容器中的2-96个样本检测量的冻干微芯试剂；所述的冻干微芯试剂为按单个反应的量分装于容器，经过冷冻干燥制成的冻干微芯型试剂。

2.根据权利要求1所述的一种用于单细胞分析的多指标混合型流式抗体冻干微芯试剂盒，其特征在于，所述冻干微芯试剂包括四种至六十种抗体；每个冻干微芯试剂含有与抗体等体积的冻干赋形剂，所述冻干赋形剂选自甘油、海藻糖、蔗糖、甘露醇或乳糖一种或多种的混合物；所述冻干微芯试剂，其形态为白色球形颗粒，所述球形颗粒的体积为5微升-60微升；所述密闭容器选自12×75毫米5毫升流式管、0.1-2毫升离心管、0.1-5毫升西林瓶或铝塑泡罩包装。

3.根据权利要求2所述的一种用于单细胞分析的多指标混合型流式抗体冻干微芯试剂盒，其特征在于，所述的抗体选自特异性结合细胞膜表面抗原、细胞外因子、细胞内因子或细胞核内因子的抗体。

4.根据权利要求3所述的一种用于单细胞分析的多指标混合型流式抗体冻干微芯试剂盒，其特征在于，所述抗体选自CD2抗体、CD5抗体、CD7抗体、CD25抗体、CD44抗体、CD57抗体、CD49d抗体、CD127抗体、CD161抗体、CCR7抗体、CXCR3抗体、CCR4抗体、CCR5抗体、CCR7抗体、CD3抗体、CD4抗体、CD8抗体、CD16抗体、CD19抗体、CD20抗体、CD56抗体、CD45抗体、CD45RA抗体、CD45RO抗体、TCR-γδ抗体、CD24抗体、CD27抗体、CD38抗体或IgD抗体。

5.根据权利要求2-4中任一项所述的一种用于单细胞分析的多指标混合型流式抗体冻干微芯试剂盒，其特征在于，所述冻干微芯试剂中的抗体分别被标记上不同的标签，所述标签为荧光标签或金属元素标签。

6.根据权利要求4所述的一种用于单细胞分析的多指标混合型流式抗体冻干微芯试剂盒，其特征在于，所述荧光标签选自荧光蛋白、合成荧光素、量子点、聚合物荧光标签和串联标签，优选的为：异硫氰酸荧光素FITC、藻红蛋白PE、多甲藻叶绿素蛋白PerCP或碘化丙啶PI。

7.根据权利要求4所述的一种用于单细胞分析的多指标混合型流式抗体冻干微芯试剂盒，其特征在于，

所述金属元素标签选自金属元素或其同位素：钇Y、钌Ru、铑Rh、钯Pd、镉Cd、铟In、镧La、铈Ce、镨Pr、钕Nd、钐Sm、铕Eu、钆Gd、铽Tb、镝Dy、钬Ho、铒Er、铥Tm、镱Yb、镥Lu、铂Pt或铋Bi。

8.根据权利要求4所述的一种用于单细胞分析的多指标混合型流式抗体冻干微芯试剂盒，其特征在于，所述冻干微芯试剂通过下列方法制备，包括下列步骤：

(1)冻干溶液的制备：将流式抗体和冻干赋形剂经过充分搅拌混合；

(2)冻干溶液的赋形：将冻干溶液匀速的滴入液氮中进行赋形；

(3)微芯的冻干：冷冻干燥；

(4)冻干微芯的封装：冻干后的试剂做充氮气保护处理，再密封包装于密闭容器中。

9.一种如权利要求1所述多指标混合型流式抗体冻干微芯试剂盒用于单细胞流式分析的方法，其特征在于，该方法包括下列步骤：

(1)获取单细胞悬液；对于外周血样本，单细胞悬液的制备方法为：用红细胞裂解液裂解外周血中的红细胞，经过离心、洗涤、重悬得到外周血单核细胞单细胞悬液；或

对于组织样本，单细胞悬液的制备方法为：用研磨过滤法或酶解法，经离心、洗涤、重悬得到组织的单细胞悬液；

(2)将抗体冻干微芯试剂溶解于步骤(1)的单细胞悬液中进行染色处理；使用时，对步骤(1)的单细胞悬液进行细胞计数，从中取出2×10⁶个细胞，将冻干微芯试剂直接加入待检测的单细胞悬液至100微升的反应体积，涡旋振荡10秒钟溶解，室温25℃孵育30分钟；

(3)用流式细胞仪或者质谱流式对处理后的单细胞样本进行检测；使用时，在步骤(2)孵育后的单细胞悬液中加入1毫升缓冲液，混合均匀后500g离心10分钟，弃去上清液，并重复一次，洗去多余抗体，用缓冲液按照适当的细胞浓度重悬后即可上机检测。