[发明专利]一种用于单细胞分析的多指标混合型流式抗体冻干微芯试剂盒

说明书

本发明提供了一种用于单细胞分析的多指标混合型流式抗体冻干微芯试剂盒，所述试剂盒内容物为存放于密闭容器中的2‑96个样本检测量的冻干微芯试剂；所述的冻干微芯试剂为按单个反应的量分装于容器，经过冷冻干燥制成的冻干微芯型试剂，在常温中活性稳定，无需冷链运输和储存，降低了管理成本和风险，单个反应份量的包装，避免了损耗，使用简便，使用成本大大降低，缩短了样本处理所需的时间，确保了样本染色处理的标准化，从而保证了结果的一致性，确保了输出结果的准确性。有较大的临床应用价值和社会效益。

技术领域

本发明涉及生物技术，具体涉及一种用于单细胞分析的多指标混合型流式抗体冻干微芯试剂盒。

背景技术

目前单细胞分析的方法主要分为两大类，基于单细胞核酸检测的单细胞测序技术和基于细胞层面蛋白表达的流式技术。其中单细胞测序技术是对单个细胞中相关的基因转录水平进行检测，以此对单个细胞中相关蛋白的表达量进行预测。但是此方法的最大缺陷在于，基因的检测不能直接对应于蛋白的表达，往往容易出现假阳性和假阴性，结果不够准确，同时检测周期长，费用高，不适合持续性监测。而基于细胞层面蛋白表达的流式细胞术能够直接通过抗原抗体反应直接检测蛋白的表达量，结果直观、准确、检测周期短，费用低，能够实现持续性的动态监测。

流式检测主要用于对体内外免疫细胞亚型的分析和定量。在人体内数量庞大和类型丰富的免疫细胞构成了人体的免疫系统。免疫细胞主要有两大类，淋系细胞和髓系细胞。其中髓系细胞有粒细胞，单核细胞等，按照细胞形态以及功能的差别又可以分为嗜碱性粒细胞，嗜酸性粒细胞，中性粒细胞，单核细胞在不同种类的细胞分化因子的刺激性又会分化成各种类型的巨噬细胞或树突状细胞。淋巴细胞是白细胞的一种，是参与机体免疫应答功能最重要的细胞组成成分。早期研究，根据淋巴细胞发生迁移、表面分子和功能的不同，大体上将淋巴细胞分为T细胞、B细胞和自然杀伤细胞。其中T细胞又分为细胞毒性T细胞、辅助性T细胞、调节性T细胞和记忆T细胞等；B细胞又可分为初始B细胞、浆细胞和记忆B细胞等亚细胞类群。随着科学研究的不断进步，免疫学领域发现了上百种细胞表面标志物，不同谱系细胞在分化、成熟、活化过程中，出现或者消失的特定抗原，称为分化抗原(CD分子)。这些CD分子主要是免疫细胞表面的黏附分子、细胞因子受体或趋化因子受体等，可以被特定的抗体所识别。这些分子在不同类型的免疫细胞上具有高度的差异性，通过对这些细胞表面标志物的分析可以将免疫细胞分为更为细致的亚细胞分类群。例如T细胞可以进一步分为辅助初始T细胞、辅助耗竭T细胞、辅助中心记忆T细胞、辅助效应记忆T细胞、细胞毒性初始T细胞、细胞毒性耗竭T细胞、细胞毒性中心记忆T细胞、细胞毒性效应记忆T细胞。

当前用于免疫细胞分型的方法主要有：免疫酶标法，流式细胞术法等。其中免疫酶标法是基于抗原抗体反应，对一个群体的免疫细胞所携带的一个或几个标志物进行检测，但这种方法无法在单细胞水平进行检测，需要的样本细胞数量大，无法同时检测多种细胞标志物，而且存在检测范围窄、操作复杂等缺点，在临床应用中只能检测某几个特定细胞类型。而流式细胞术通过多种抗体组合方式，可以在单细胞水平对免疫细胞做足够细致的亚细胞类群分型，其操作相对简单，在临床中得到广泛的应用。流式细胞术是在细胞分子水平上通过单克隆抗体对单个细胞或者其他生物离子进行多参数、高通量、快速的定量分析。可以高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数，具有通道多速度快、精度高、准确性好的优点。流式细胞术可以实现对细胞群体精准的免疫分型，对细胞内信号传导网络进行全面的分析，分析细胞亚群之间的功能联系，以及对于大量样品的高通量多参数检测。在造血、免疫、干细胞、癌症以及药物筛选等多个领域的研究有着广泛的应用。

现有流式检测系统主要分为两大类，一类是基于光学检测系统的经典型流式细胞检测系统，通过荧光素标记的抗体对细胞进行染色，通过光学检测系统对不同荧光素激发光光谱的分析从而对单个细胞的多种蛋白水平进行分析。另一类是基于质谱检测系统的新型流式系统，通过金属元素标记的抗体对细胞进行染色，并且通过质谱检测器分析金属元素的含量从而对单个细胞多种蛋白水平进行分析。两种流式检测系统都具有通道多，分析速度快，灵敏度高的特点。