[发明专利]一种百合的活体保存方法

说明书

本发明公开了一种百合的活体保存方法，包括以下步骤：步骤1：选取直径3‑10cm的百合种球，剥取种球外层鳞片作为活体保存的外植体；步骤2：对外植体进行灭菌处理；步骤3：将灭菌处理后的外植体置入准备好的保存培养基中活体保存；保存培养基为：改良MS+肌醇0.15‑0.35g/L+甘露醇400‑700mg/L+硝酸银0.2‑0.6mg/L，改良MS配方为：大量元素含量减少40%‑60%，其余成分不变；本发明系统研究了活体百合保存所需培养基营养成分组成和配比、最佳培养条件，提高了百合活体保存的成活率，而且操作简便，成本低廉，简化了保存条件，降低了保存成本。为实现大规模百合活体保存奠定了可靠基础。

技术领域

本发明属于植物生物技术领域，具体涉及一种百合的活体保存方法。

背景技术

百合是单子叶植物纲百合科（Liliaccae）百合属（Lilium）的多年生球根草本植物。百合的观赏价值、食用价值和药用价值在市场中具有举足轻重的地位，同时，中国是百合属植物特有品种资源产出大国。然而，由于环境污染，病虫毒害等恶劣环境导致很多百合栽培品种濒临灭绝；因此，使百合现有种质资源得到适当的保存是目前需要关注的焦点。

离体保存（conservation in vitro），指对离开种质资源母体的种子、花粉及根、穗条、芽等繁殖材料进行保存。百合的离体保存方式包括组织培养离体保存，限制生长离体保存，超低温离体保存，其中组织培养离体保存只能实现百合的短期保存；限制生长离体保存是以组织培养离体保存为基础，采用低温保存的方式保存百合；超低温离体保存指在-80℃的低温条件下对植物器官、组织或细胞进行离体保存。常规的百合种质资源采用低温（1-2℃）保存方法，使百合种球营养流失较大，当保存时间过长时会降低种球的活性，降低种球出苗率，而且保存成本高，限制条件多，存活率低。

发明内容

培养离体保存时间短，继代培养多次影响百合品质的问题，使用本发明至少可以保存百合500天以上。

本发明解决技术问题所采用的技术方案是：

一种百合的活体保存方法，包括以下步骤 ：

步骤1：选取直径3-10cm的百合种球，剥取种球外层鳞片作为活体保存的外植体；

步骤2：对外植体进行灭菌处理，在超净台上，将外植体放入无菌容器中，用75%的酒精浸泡1-3min，取出外植体，然后用无菌水冲洗4-5次，再用0.1-0.2%HgCl₂溶液浸泡15-25min，随后用无菌水冲洗4-5次，每次冲洗3min，最后无菌滤纸吸干水分；

步骤3：将灭菌处理后的外植体置入准备好的保存培养基中活体保存；

所述保存培养基为：

改良MS+肌醇0.15-0.35g/L+甘露醇400-700mg/L+硝酸银0.2-0.6mg/L

改良MS配方为：大量元素含量减少40%-60%，其余成分不变；

所述活体保存条件为：温度25±1℃，光照强度1000-2000Lx，光照时间 12-15 h/d。

而且，所述剥取种球外层鳞片，包括以下步骤：

（1）取洁净无病斑的百合外层鳞片，并用水冲洗干净；

（2）将百合外层鳞片用洗洁精溶液浸洗10-25min；

（3）浸洗结束后将百合外层鳞片用水冲洗3-5h。

而且，所述外植体用75%的酒精浸泡1min，然后用无菌水冲洗5次，再用0.1%HgCl₂溶液浸泡20min，随后用无菌水冲洗5次，每次冲洗3min。

而且，所述保存培养基为：