[发明专利]一种微量蛋白免疫印迹检测方法在审
| 申请号： | 202011581697.8 | 申请日： | 2020-12-28 |
| 公开（公告）号： | CN112782398A | 公开（公告）日： | 2021-05-11 |
| 发明（设计）人： | 谢彪 | 申请（专利权）人： | 重庆生命知源科技有限公司 |
| 主分类号： | G01N33/531 | 分类号： | G01N33/531;G01N33/53;G01N27/447 |
| 代理公司： | 北京同恒源知识产权代理有限公司 11275 | 代理人： | 赵荣之 |
| 地址： | 400010 重庆市渝*** | 国省代码： | 重庆;50 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 微量 蛋白 免疫 印迹 检测 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种微量蛋白免疫印迹检测方法，其特征在于，所述检测方法为，
(1)收集待测细胞，调整细胞个数为500-20000个，加入体积比为1000:1:1的2×上样缓冲液、1000×蛋白酶和1000×磷酸酶抑制剂混合液裂解细胞，得到细胞裂解液；
(2)向细胞裂解液中加入等体积2×上样缓冲液，混匀后煮沸，得到上样蛋白溶液；
(3)配置电泳凝胶，将凝胶倒入制胶板后，插入制孔梳，待胶凝固后取出制孔梳，形成上样孔，所述上样孔的宽为1.0-1.5mm；
(4)将(2)中的上样蛋白溶液加入所述上样孔中，进行电泳；
(5)再进行转模、抗体孵育，最后用ECL试剂进行检测。
2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(2)中所述上样缓冲液为2×。
3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(3)中所述电泳凝胶为SDS-PAGE电泳凝胶。
4.如权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述SDS-PAGE电泳凝胶包括5％的浓缩胶和10％分离胶。
5.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(4)中所述电泳的条件为先100V电泳15min，再150V至指示剂电泳到底部。
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